人神經(jīng)元細胞提取物【Human Brain: Normal Neuronal CellsDerivatives】 人神經(jīng)元細胞提取物是從人原代神經(jīng)元細胞提取的，人原代神經(jīng)元細胞從正常人神經(jīng)元組織制備。正常人神經(jīng)元組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。

收到凍存細胞的處理方法：
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)暖細胞）；
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中，輕輕晃勻；
5.置于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊)；
6.第二天，用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。

實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
1163135-95-2  5-trans-17-phenyl trinor Prostaglandin F2&#945; ethyl amide  1mg  Parelaphostrongylus tenius腦膜蠕蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 

1163135-95-2  5-trans-17-phenyl trinor Prostaglandin F2&#945; ethyl amide  25mg  Highlands J Virus高地J病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 

1163135-95-2  5-trans-17-phenyl trinor Prostaglandin F2&#945; ethyl amide  5mg  Parelaphostrongylus tenius腦膜蠕蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 

1163135-96-3  15-keto-17-phenyl trinor Prostaglandin F2&#945; ethyl amide  10mg  Equine Rhinopneumonitis Virus(ERV)馬鼻肺炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 

1163135-96-3  15-keto-17-phenyl trinor Prostaglandin F2&#945; ethyl amide  1mg  Kobuvirus嵴病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
EB病毒轉(zhuǎn)化的B細胞(彝族);HYLD-鹽酸伐昔洛韋D-Valacyclovir 質(zhì)量規(guī)格：美國進口

大鼠肝細胞瘤;H4-II-E-C3 結(jié)腸腺癌細胞，CW-2細胞 R1610細胞，中國倉鼠倉鼠肺細胞伐昔洛韋雜質(zhì)FValacyclovir Impurity F質(zhì)量規(guī)格：美國進口

BPH-1, 前列腺增生細胞 Human4,5-二氯熒光素(>98%,BR)4,5-Dichlorofluorescein質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

ICOSLG Others Human  ICOSLG / B7-H2 / ICOSL / CD275 細胞裂解液 (陽性對照) 對乙氧基苯(>98%,BR)4-Ethoxybenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

滑膜細胞培養(yǎng)基SM4-羥基(>98%,BR)4-Hydroxycoumarin質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
人神經(jīng)元細胞提取物說明P815小鼠肥大細胞瘤細胞 P815 mouse mastocytoma cell DMEM培養(yǎng)基+10%FBS異丁司特(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標準品Ibudilast

白細胞介素-10超家族吉西他濱質(zhì)量規(guī)格：>98%,free baseGemcitabine

SF767(腦瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 SHG44(膠質(zhì)瘤細胞)沙利度胺（反應(yīng)停）質(zhì)量規(guī)格：>98%Thalidomide

CL-0052Caki-1(腎透明細胞癌細胞)5×106cells/瓶×2沙利度胺(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品Thalidomide

TNFRSF18 Others Human  GI / TNFRSF18 細胞裂解液 (陽性對照) 乙酰紫堇靈（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Acetylcorynoline
注意事項：
1.接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。