當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞說明
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞【Human Bone: Articular Chondrocytes】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞說明 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963703 |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
RNA合成1樣本 雙氯芬酸鈉 Diclofenac 質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR
RNA聚烯酰胺凝膠電泳試劑盒10 雙氯芬酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Diclofenac 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品
RNA酶溶液(RNA酶保護(hù)分析)50毫升 加巴噴丁 Gabapentin 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%,USP30
RNA清除試劑盒100 加巴噴?。?biāo)準(zhǔn)品) Gabapentin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RNA探針聚合酶標(biāo)記試劑盒10 多潘立酮 Domperidone 質(zhì)量規(guī)格:>99%,EP5.0
RNA探針同位素([α32P]CTP)聚合酶標(biāo)記試劑盒20 多潘立酮(標(biāo)準(zhǔn)品) Domperidone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
RNA樣品儲存液50毫升 氯硝柳胺 Niclosamide 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
RNA樣品儲存液50毫升 氯硝柳胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Niclosamide 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RNA熒光(RiboGreen)定量檢測試劑盒20 環(huán)丙沙星 Ciprofloxacin 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
RNA熒光(RiboGreen)定量檢測試劑盒20 環(huán)丙沙星(標(biāo)準(zhǔn)品) Ciprofloxacin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISA檢測試劑盒Mousemajorhistocompatibilitycomplex-Ⅲ,MHC-Ⅲ/H-2ⅢELISAKit 96T/48T 鬼箭羽堿,葉含衛(wèi)矛堿 HPLC≥95% 20mg
人核心結(jié)合因子α1,CBFA1/RUNX2 試劑盒 Human Core Binding Factor alpha1 CBFA1/RUNX2 ELISA Kit 乙?;?/span>beta咔啉 HPLC≥95% 20mg
RatCytosolicPhospholipaseA2,cPLA2ELISAKit大鼠胞漿型0脂酶A2(cPLA2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 乙氧基羰基beta咔啉 HPLC≥95% 20mg
3′端DNA生物素轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記試劑盒10 羥基甲氧基鐵屎米酮 HPLC≥95% 20mg
MouseE-Cadherin,E-CadELISA試劑盒小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基鐵屎米酮 HPLC≥95% 20mg
小鼠細(xì)胞角蛋白18-M65(CK 18-M65)ELISA試劑盒 ,英文名: CK 18-M65 ELISA Kit 羥基鐵屎米酮 HPLC≥95% 20mg
小鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA檢測試劑盒MouseAngiopoietin4,ANG-4ELISAKit 96T/48T ,二甲氧基鐵屎米酮 HPLC≥95% 20mg
人核心蛋白聚糖(DCN)試劑盒 Human Decorin/Bone proteoglycan II,DCN ELISA Kit ,二甲氧基鐵屎米酮 HPLC≥95% 20mg
RatDCspecificiercellularadhesionmolecule3-grabbingnoniegrin,DC-SIGN/CD209ELISAKit大鼠樹突狀細(xì)胞表面特異性C型凝集素-細(xì)胞間黏附分子3結(jié)合非整合素分子(DC-SIGN/CD209)規(guī)格:96T/48T 氯化天竺葵素O蕓香糖苷 HPLC≥95% 20mg
30%ACRYLAMIDE-BIS(19:1)溶液500毫升 氯化失車菊素O蕓香糖苷 HPLC≥95% 20mg
人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞說明RatCXC-chemokineligand16,CXCL16ELISA試劑盒大鼠CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙氯芬酸鉀(標(biāo)準(zhǔn)品) Diclofenac Potassium 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
RatCXC-chemokinereceptor3,CXCR3ELISAKit大鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙氯芬酸甲酯 Diclofenac Methyl Ester 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
RatCXC-chemokinereceptor3,CXCR3ELISA試劑盒大鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙硫侖-d20 Disulfiram-d20 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
Ratcyclicadenosinemonophosphate,cAMPELISAKit大鼠環(huán)0酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙硫侖(標(biāo)準(zhǔn)品) Disulfiram 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
Ratcyclicadenosinemonophosphate,cAMPELISA試劑盒大鼠環(huán)0酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙硫磷(標(biāo)準(zhǔn)品) Temephos 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
Ratcyclicadenosinemonophosphate,cAMPELISA試劑盒大鼠環(huán)0酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙甲脒標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=4%) Amitraz solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=4%
RatCyclicguanosinemonophosphate,cGMPELISAKit大鼠環(huán)0酸鳥苷(cGMP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙甲脒標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%) Amitraz solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=2%
RatCyclicguanosinemonophosphate,cGMPELISA試劑盒大鼠環(huán)0酸鳥苷(cGMP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙甲脒(標(biāo)準(zhǔn)品) Amitraz 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,分析標(biāo)準(zhǔn)品
RatCyclin-D1ELISAKit大鼠細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙甲脒 Amitraz 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
RatCyclin-D1ELISA試劑盒大鼠細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙環(huán)醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Bicyclol 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
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