當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>細胞培養(yǎng)>>原代細胞>> T25m2人椎間盤髓核細胞操作
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
產品名稱 | 人椎間盤髓核細胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963704 |
人椎間盤髓核細胞【Human Intervertebral Disc: Nucleus Pulposus Cells】產品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩(wěn)定。在生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
人紅細胞膜蛋白(EMP)ELISA檢測試劑盒Humanerythrocytemembraneprotein,EMP 96T/48T N-BOC-D-色氨醇 N-Boc-D-tryptophanol 質量規(guī)格:BR,>98%
人紅細胞生成素(EPO)試劑盒 Human Erythropoietin,EPO ELISA Kit DL- 2-Phenylglycinol 質量規(guī)格:>98%,BR
人紅細胞生成素受體(EPOR)試劑盒 Human Erythropoietin receptor,EPOR ELISA Kit 甘氨酸-L-亮氨酸 Glycyl-L-leucine 質量規(guī)格:0.98
人紅細胞原卟啉(EP)試劑盒 Human erythrocyte protoporphyrin,EP ELISA Kit 雙甘氨二肽 Gly-Gly 質量規(guī)格:>99%,BR
人琥珀酰輔酶A合成酶(SCS)試劑盒 Human succinyl coenzyme A syhetase,SCS ELISA kit 重組人胰島素 Human recombinant Insulin 質量規(guī)格:效價測定
人花生四烯酸(AA)ELISA檢測試劑盒HumanArachidonicAcid,AA 96T/48T 人胰島素 Human Insulin 質量規(guī)格:測定用
人花生四烯酸(AA)試劑盒 Human Arachidonic Acid,AA ELISA Kit 硝酸舍他康唑 Sertaconazole nitrate 質量規(guī)格:>98%,BR
人花生四烯酸12 - 脂氧合酶,12S型(ALOX12/LOG12)試劑盒 Human ALOX12 ELISA Kit 醋酸依降鈣素 Elcatonin Acetate 質量規(guī)格:BR
人花生四烯酸15脂加氧酶(ALOX15/LOG15)試劑盒 Human ALOX15/LOG15 ELISA kit 醋酸恩夫韋地 Enfuvirtide Acetate 質量規(guī)格:BR,>98%
人花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)ELISA檢測試劑盒Humanarachidonate5-lipoxygenase,ALOX-5 96T/48T D-海藻糖無水 D-(+)-Trehalose Anhydrous 質量規(guī)格:≥99%,BR
MouseEmbryonicStemMESPU30,M30ELISA試劑盒小鼠胚胎干細胞系MESPU30(M30)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 氯化飛燕草素O蕓香糖苷 HPLC≥95% 20mg
小鼠細胞角蛋白18-M30(CK 18-M30)ELISA試劑盒 ,英文名: CK 18-M30 ELISA Kit 氯化飛燕草素,O二葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg
小鼠堿性0酸酶(ALP)ELISA檢測試劑盒Mousealkalinephosphatase,ALPELISAKit 96T/48T 氯化失車菊素,O雙葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg
人核糖體合成蛋白NSA2同源物(NSA2)試劑盒 Human NSA2 ELISA Kit 二氫葫蘆素B HPLC≥95% 20mg
RatDehydroepiandrosteroneS7,DHEA-S7ELISAKit大鼠脫氫表雄同S7(DHEA-S7)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 葫蘆素B OBetaD葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg
30%ACRYLAMIDE-BIS(29:1)溶液500毫升 甲基新苦木素 HPLC≥95% 20mg
MouseEndomeiumAibody,EMAbELISA試劑盒小鼠抗子宮內膜抗體(EMAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T ,二去氫隱丹參酮 HPLC≥95% 20mg
小鼠細胞間粘附分子5(ICAM5)ELISA試劑盒 ,英文名: ICAM5 ELISA Kit 丹參二醇A HPLC≥95% 20mg
兔子白介素2(IL-2)ELISA檢測試劑盒RabbitIerleukin2,IL-2ELISAKit 96T/48T 丹參二醇B HPLC≥95% 20mg
牛血清白蛋白(ALB)試劑盒 Bovine Serum albumin,ALB ELISA kit 丹參二醇C HPLC≥95% 20mg
人椎間盤髓核細胞操作RatCyclin-D2ELISAKit大鼠細胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙甘氨二肽 Gly-Gly 質量規(guī)格:>99%,BR
RatCyclin-D2ELISA試劑盒大鼠細胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙氟磺草胺(標準品) Florasulam 質量規(guī)格:分析標準品,99.8%
RatCyclin-D3ELISAKit大鼠細胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙酚芴(>98%,BR) 9,9-Bis(4-hydroxyphenyl) fluorine 質量規(guī)格:>98%,BR
RatCyclin-D3ELISA試劑盒大鼠細胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙酚 C(>98.0%(GC)) 2,2-Bis(4-hydroxy-3-methylphenyl)propane 質量規(guī)格:>98.0%(GC)
RatCyclosporineA,CsAELISAKit大鼠環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙醋瑞因 HPLC≥98% 20mg
RatCyclosporineA,CsAELISA試劑盒大鼠環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙壁碳納米管(>50%) 小于5nm(直徑),5-15μm(長度) Carbon Nanotube Double-walled (>50%) below 5nm(diam.), 5-15µm(length) 質量規(guī)格:
RatCystatinC,Cys-CELISAKit大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙[4-(2-羥乙氧基)苯基]砜(>97.0%(GC)) Bis[4-(2-hydroxyethoxy)phenyl] Sulfone 質量規(guī)格:>97.0%(GC)
RatCystatinC,Cys-CELISA試劑盒大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙[3,5-二-4-(2-羥乙氧基)苯基]砜(>96.0%(GC)) Bis[3,5-dibromo-4-(2-hydroxyethoxy)phenyl] Sulfone 質量規(guī)格:>96.0%(GC)
RatCytochrome-C,Cyt-CELISAKit大鼠細胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙(亞甲基二硫代)四硫富瓦烯[有機電子材料] Bis(methylenedithio)tetrathiafulvalene [Organic Electronic Material] 質量規(guī)格:
RatCytochrome-C,Cyt-CELISA試劑盒大鼠細胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雙(羰基二硫代)四硫富瓦烯(>95.0%(W)) Bis(carbonyldithio)tetrathiafulvalene 質量規(guī)格:>95.0%(W)
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