當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2人肺動脈成纖維細(xì)胞說明
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
人肺動脈成纖維細(xì)胞【Human Lung: Pulmonary Fibroblast Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 人肺動脈成纖維細(xì)胞說明 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963711 |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
犬胰高血糖素樣肽1(GLP1)試劑盒 Dog glucagon like peptide 1,GLP1 ELISA Kit 二氧化硅(99.99%,1-3mm) Silicon dioxide 質(zhì)量規(guī)格:99.99%,1-3mm
犬胰腺甘油三酯脂酶(PNLIP)試劑盒 Dog Pancreatic iacylglycerol lipase,PNLIP ELISA kit 石英砂(AR,6-10目或2-3mm) Sand 質(zhì)量規(guī)格:AR,6-10目或2-3mm
犬乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA檢測試劑盒Canineacetylcholinereceptoraibody,AChRab 96T/48T 石英砂(AR,8-16目或1-2mm) Sand 質(zhì)量規(guī)格:AR,8-16目或1-2mm
犬乙酰膽堿受體抗體(AChRab)試劑盒 Canine acetylcholine receptor aibody,AChRab ELISA Kit 二氫銨(SP) Ammonium phosphate monobasic 質(zhì)量規(guī)格:SP
犬乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA檢測試劑盒CaninehepatitisBvirussurfaceaigen,HBsAg 96T/48T 二甲基亞砜(光譜級,>99.9% (GC)) Dimethyl sulfoxide 質(zhì)量規(guī)格:光譜級,>99.9% (GC)
犬乙型肝炎表面抗原(HBsAg)試劑盒 Canine hepatitis B virus surface aigen,HBsAg ELISA Kit N,N-二甲基乙酰胺(光譜級,≥99.8%(GC)) N-N-Dimethylacetamide 質(zhì)量規(guī)格:光譜級,≥99.8%(GC)
犬抑制素β-B(Inhbb)試劑盒 Canine inhibin beta-B,Inhbb ELISA Kit 二甲基亞砜(ACS,光譜級) Dimethyl sulfoxide 質(zhì)量規(guī)格:ACS,光譜級
犬游離甲狀腺素(FT4)試劑盒 Canine Free Thyroxine,FT4 ELISA Kit 乙二醇(光譜 ,≥99%) Ethylene glycol 質(zhì)量規(guī)格:光譜 ,≥99%
犬游離狀腺原氨酸(Free-T3)試劑盒 Canine Free i-iodothyronine Indes,Free-T3 ELISA Kit 甘油(for spectroscopy,≥99.5%) Glycerol in water for HPLC verification 質(zhì)量規(guī)格:for spectroscopy,≥99.5%
犬游離脂肪酸(FFA)試劑盒 Dog free fatty acids,FFA ELISA kit 碳酸鋰(SP) Lithium carbonate 質(zhì)量規(guī)格:SP
英文名稱humaG-AbELISAKIT人抗甲狀腺球蛋白抗體(TG-Ab)規(guī)格:96T/48T 訶子鞣質(zhì) HPLC≥95% 20mg
地生蘭(terresial)播種培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑 脫氫姜酮 HPLC≥95% 20mg
Ratovariancancermarker-CA125ELISA試劑盒大鼠卵巢癌標(biāo)志物CA125ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 姜烯酚 HPLC≥95% 20mg
小鼠硒蛋白M(SELM)ELISA試劑盒 ,英文名: SELM ELISA Kit 甲基 二乙酰氧基姜二醇 HPLC≥95% 20mg
小鼠角化細(xì)胞因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA檢測試劑盒Mousekeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit 96T/48T 異常山乙素 HPLC≥95% 20mg
人核糖核酸酶(RNASE1/RIB1/RNS1)試劑盒 Human ribonuclease pancreatic,RNASE1/RIB1/RNS1 ELISA kit 新北美圣草苷 HPLC≥95% 20mg
RatDihydrotestosterone,DHTELISAKit大鼠雙氫睪同(DHT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 苦瓜皂苷 K HPLC≥97% 20mg
3-羥-3-甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原酶待測樣品制備試劑盒20 苦瓜皂苷 F HPLC≥95% 20mg
Mouseendotoxin,ETELISA試劑盒小鼠內(nèi)(ET)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 苦瓜皂苷 L HPLC≥95% 20mg
小鼠戊糖素(Peosidine)ELISA試劑盒 ,英文名: Peosidine ELISA Kit 苦瓜皂苷 P HPLC≥95% 20mg
人肺動脈成纖維細(xì)胞說明RatE-SelectinELISAKit大鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石蒜裂堿 HPLC≥98% 20mg
RatEsiol,E3ELISAKit大鼠雌三醇(E3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石蒜堿 HPLC≥98% 20mg
RatEsogeeceptor,ERELISAKit大鼠雌激素受體(ER)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石松靈堿 HPLC≥98% 20mg
Ratesogen,EELISAKit大鼠雌激素(E)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石松醇 HPLC≥98% 5mg
RatFactorⅧ-relatedAigen,FⅧAgELISAKit大鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石杉堿乙 HPLC≥92% 20mg
RatFactorⅧ-relatedAigen,FⅧAgELISA試劑盒大鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石杉堿甲(標(biāo)準(zhǔn)品) (−)-Huperzine A 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RatfactorB,BFELISAKit大鼠B因子(BF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石杉堿甲 HPLC≥99% 20mg
RatfactorB,BFELISA試劑盒大鼠B因子(BF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石杉堿甲 HPLC≥98% 20mg
RatFactor-relatedApoptosis,FASELISAKit大鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石杉堿甲 (−)-Huperzine A 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,BR
RatFactor-relatedApoptosis,FASELISA試劑盒大鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石杉堿丙 HPLC≥98% 20mg
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