使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系油菜GT73探針法qPCR試劑盒
貨號:CP97191
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是轉(zhuǎn)基因品系油菜GT73探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
anti- Cofilin 2 antibody資源名稱黑芝種屬:Ganoderma│atrum J. D. Zhao L. W. Hsu & X. Q. Zhang分離基物:子實體提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法；定期移植法

anti- Cofilin antibody資源名稱香栓菌種屬:Trametes│suaveolens (L.) Fr.分離基物:基物提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25存儲條件:定期移植法

anti- Cofilin antibody資源名稱榆生離褶傘種屬:Hypsizygus│ulmarius (Bull.) Redhead提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25存儲條件:定期移植法

anti- COG1 antibody資源名稱大孔菌種屬:Favolus│alveolaris (Bosc) Quél.分離基物:擔子果提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25存儲條件:定期移植法

anti- COG3 antibody資源名稱松木層孔菌種屬:Porodaedalea│pini (Brot.) Murrill分離基物:活立木提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25

anti- COG6 antibody資源名稱假蜜環(huán)菌種屬:Armillaria│tabescens (Scop.) Emel分離基物:垂柳提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:72生長條件:25

anti- COG7 antibody資源名稱秀珍菇種屬:Pleurotus│geesterani Singer分離基物:子實體提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25

anti- COG8 antibody資源名稱硬柄小皮傘種屬:Marasmius│oreades (Bolton) Fr.分離基物:校園草坪提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no應用領域:可食用；可能為草坪菌根真菌。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14

anti- Coilin antibody資源名稱白環(huán)粘奧德蘑種屬:Oudemansiella│mucida (Schrad.) Hohn.分離基物:子實體提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25

anti- COL10A1 antibody資源名稱毛木耳種屬:Auricularia│polytricha (Mont.) Sacc.分離基物:子實體提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25

anti- COL4A3BP antibody資源名稱潔麗香菇種屬:Neolentinus│lepideus (Fr.) Redhead & Ginns提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法；定期移植法

anti- COLEC11 antibody資源名稱泡囊側(cè)耳種屬:Pleurotus│cystidiosus O. K. Mill.提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25存儲條件:定期移植法

anti- Collagen Type I antibody資源名稱小牛肝菌種屬:Boletus│paluster Peck分離基物:菌體提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:27存儲條件:定期移植法

anti- Collagen Type I antibody資源名稱紫丁香蘑種屬:Lepista│nuda (Bull.) Cooke分離基物:子實體提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25

anti- Collagen Type II antibody資源名稱大球蓋菇種屬:Stropharia│rugosoannulata Farl. ex Murrill分離基物:枯葉提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:26-28

anti- Collagen Type III antibody資源名稱約氏不動桿菌種屬:Acinetobacter│johnsonii Bouvet and Grimont分離基物:林間水體提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no應用領域:具耐貧瘠基因，可做基因工程出發(fā)菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:141生長條件:28

anti- Collagen Type III(N-Terminal) antibody資源名稱沙雷氏菌種屬:Serratia│nematodiphila Zhang et al.分離基物:根際土壤提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no應用領域:微生物肥料培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:141

anti- Collagen Type IV antibody資源名稱氧化節(jié)桿菌種屬:Acetobacter│oxydans Sguros分離基物:土壤提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:141生長條件:30
轉(zhuǎn)基因品系油菜GT73探針法qPCR試劑盒小鼠 IL-10 Human FLT3(Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3) ELISA Kit0.188ng/ml0.313-20ng/ml

小鼠Diphtheria IgG antibody Human LIF(Leukemia inhibitory factor) ELISA Kit18.75pg/ml31.25-2000pg/ml

小鼠albumin Human PDGFA(Platelet-derived growth factor subunit A) ELISA Kit9.375pg/ml15.625-1000pg/ml

小鼠 CEA Human KITLG(Kit ligand) ELISA Kit18.75pg/ml31.2-2000pg/ml

小鼠Orexin A Human TIE1(Tyrosine-protein kinase receptor Tie-1) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml

小鼠 SNCG Human TNFRSF1A(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A) ELISA Kit4.688pg/ml7.813-500pg/ml

小鼠 IFI16/p16 Human TNFRSF1B(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B) ELISA Kit4.688pg/ml7.813-500pg/ml