使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系南瓜CZW-3探針?lè)╭PCR試劑盒
貨號(hào):CP97122
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
?實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

以下是轉(zhuǎn)基因品系南瓜CZW-3探針?lè)╭PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
anti- ATP5G2-Specific antibody資源名稱Sphingobacteriumcomposti種屬:Sphingobacteriumcomposti分離基物:cottonwastecompost安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2生長(zhǎng)條件:28°C

anti- ATP5H antibody資源名稱水螺菌種屬:Aquaspirillumsp.分離基物:filtrateofslowsandfiltersfordrinkingwater,theHague,theNetherlands安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:assayofassimilableorganiccarbonAOC培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2生長(zhǎng)條件:20-25°C

anti- ATP5H antibody資源名稱腸炎沙門氏菌腸炎亞種種屬:Salmonella enterica subsp.enterica分離基物:tissue,animal提供形式:凍干粉安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:ControlCulturemediatestingpreparatorytestcontrol培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂：牛 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。

anti- ATP5I antibody資源名稱萎蔫短小桿菌種屬:Curtobacterium│flaccumfaciens分離基物:類農(nóng)藥農(nóng)田施用土壤提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:在無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基:中添50mg/L的農(nóng)藥，對(duì)速威降解率達(dá)40％，用于教學(xué)或科研。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:33

anti- ATP5J antibody資源名稱海藻希瓦氏菌種屬:Shewanella│algae分離基物:海綿Myclae adhaerens 表面提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:potential antifouling 潛在的抗污損活性培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:467生長(zhǎng)條件:30℃

anti- ATP5L antibody資源名稱嗜鹽細(xì)菌屬種屬:PontibacillusmarinusLimetal.2005分離基物:solarsalternsoil安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:78生長(zhǎng)條件:30°C

anti- ATP6AP1 antibody資源名稱丸酮叢毛單胞菌種屬:Comamonas testosterone提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂：牛 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生長(zhǎng)條件:30℃，好氧生長(zhǎng)特性革蘭氏陰性細(xì)菌，化能異養(yǎng)，嚴(yán)格好氧。

anti- ATP6V0D1 antibody資源名稱新鞘氨醇單胞菌種屬:Novosphingobiumtardaugens安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2生長(zhǎng)條件:30℃

anti- ATP6V1A antibody資源名稱蜃樓耶爾森氏菌種屬:Francisellaphilomiragia安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2生長(zhǎng)條件:30℃

anti- ATP6V1A antibody資源名稱脫氮假單胞菌種屬:Pseudomonas sp.提供形式:凍干粉安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂：蛋白胨 10.0 g，牛肉提取物 3.0 g，NaCl 5.0 g，瓊脂 15.0 g，蒸餾水 1.0 L，pH 7.0生長(zhǎng)條件:30℃，好氧

anti- ATP6V1B1 antibody資源名稱脫氮付球菌種屬:Paracoccusdenitrificans安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2生長(zhǎng)條件:30℃

anti- ATP6V1B2 antibody資源名稱桃色歐文氏菌種屬:Erwiniapersicina安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2生長(zhǎng)條件:25℃

anti- ATP6V1C1 antibody資源名稱丁香假單胞菌種屬:Pseudomonas syringae提供形式:凍干物安全等級(jí):4模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂：膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生長(zhǎng)條件:26℃，好氧，24-48h，鏡檢為陰性桿菌，純

anti- ATP6V1C2 antibody資源名稱白色噬瓊膠菌種屬:Agarivoransalbus提供形式:凍干粉安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:細(xì)菌用海洋液體培養(yǎng)基:2216E：酵母膏 1.0g，蛋白胨 5.0g，F(xiàn)e(III) citrate 0.1g，NaCl 19.45g，MgCl2 5.9g，KCl 0.55g，Na2SO4 3.24g，CaCl2 1.80g，Na2CO3 0.16g，KBr 0.08g，SrCl2 34.0mg，H3BO3 22.0mg，NaSiO3 4.0mg，NaF 2.4g，NH4NO3 1.6mg，Na2HPO4 8mg，蒸餾水 1.0L，pH7.6。121℃，15min。生長(zhǎng)條件:25℃，好氧

anti- ATP6V1D antibody資源名稱鼠李糖乳桿菌種屬:Lactobacillus rhamnosus提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:MRS培養(yǎng)基:酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉 4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸鎂 0.2 g，乙酸鈉 5.0 g，檸檬酸三銨 2.0 g，磷酸氫二鉀 2.0 g，硫酸錳 0.05 g，吐溫80 1.0 g，蒸餾水 1000mL。pH6.2±0.2。121℃，15min。生長(zhǎng)條件:37℃，微好氧存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

anti- ATP6V1E1 antibody資源名稱噬糖鹽紅菌種屬:Halorubrum│saccharovorum提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:Type strain；培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:212生長(zhǎng)條件:37℃

anti- ATP6V1E2 antibody資源名稱師崗鏈霉菌種屬:Streptomycesmorookaense(LocciandSchofield)WittandStackebrandt安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:12生長(zhǎng)條件:28℃

anti- ATP6V1F antibody資源名稱彎曲芽孢桿菌種屬:Bacillus flexus提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂：膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生長(zhǎng)條件:30℃，好氧
轉(zhuǎn)基因品系南瓜CZW-3探針?lè)╭PCR試劑盒小鼠 HSP-27 Chicken DHT(Dihydrotestosterone) ELISA Kit22.5pg/ml39.063-2500pg/ml

小鼠 Hsp-20 Chicken OCLN(Occludin) ELISA Kit46.88pg/ml78.13-5000pg/ml

小鼠 IMA Chicken IL-1A(Interleukin 1 Alpha) ELISA Kit4.688pg/ml7.813-500pg/ml

小鼠 ALD Chicken PRL(Prolactin) ELISA Kit0.469ng/ml0.781-50ng/ml

小鼠 NA Chicken GH(Growth Hormone) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml

小鼠chemokine (C-C motif) ligand 1 Camel IFN-γ(Interferon Gamma) ELISA Kit18.75pg/ml31.25-2000pg/ml

小鼠 FK Camel IL-10(Interleukin 10) ELISA Kit9.375pg/ml 15.625-1000pg/ml