使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產品名稱：轉基因品系番茄BioScien PCR試劑盒
貨號:CP97006
產品規(guī)格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是轉基因品系番茄BioScien PCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
Human Acetylated HB(Acetylated Hemoglobin) ELISA Kit資源名稱噬糖菌種屬:Saccharophagus│sp.分離基物:水樣/表層海水

Human SBDP 120(Alpha II SPECTRIN BREAKDOWN PRODUCT 120) ELISA Kit資源名稱地中海亞硫酸鹽桿菌種屬:Sulfitobacter│mediterraneus分離基物:水樣/表層海水

Human SBDP 145(Alpha II SPECTRIN BREAKDOWN PRODUCT) ELISA Kit資源名稱耐冷嗜冷芽孢桿菌種屬:Psychrobacillus│psychrodurans分離基物:沉積物/深灰色沉積物

Human SBDP 150(Alpha II SPECTRIN BREAKDOWN PRODUCT) ELISA Kit資源名稱巴利阿里島假單胞菌種屬:Pseudomonas│balearica分離基物:沉積物/TVG沉積物

Human SP(Substance P) ELISA Kit資源名稱鞘氨醇盒菌(加詞待譯)種屬:Sphingopyxis│ummariensis分離基物:沉積物/TVG淺黃色鈣質軟泥

Human PI3K(Phosphotylinosital 3 Kinase) ELISA Kit資源名稱人型副球菌種屬:Paracoccus│homiensis分離基物:沉積物/TVG硫化物

Human STATH(Statherin) ELISA Kit資源名稱噬油深海彎曲菌種屬:Thalassolituus│oleivorans分離基物:水樣/表層海水

Human 3-MH(3-methylhistidine) ELISA Kit資源名稱短芽胞桿菌(加詞待譯)種屬:Brevibacillus│reuszeri分離基物:土壤/森林樹下土

Human PIF/DCD(Proteolysis Inducing Factor/Dermcidin) ELISA Kit資源名稱酸快生芽孢桿菌種屬:Bacillus│acidiceler分離基物:土壤/森林樹下土

Human PAX-8(Paired box protein pax-8) ELISA Kit資源名稱抗生素鏈霉菌種屬:Streptomyces│antibioticus分離基物:土壤/死椰子樹芯覆土

Human ITGA1/CD49a(Integrin alpha-1) ELISA Kit資源名稱廈門小白卵狀菌種屬:Albidovulum│xiamenense分離基物:水樣/表層溫泉水

Human ProBDNF(pro Brain Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit資源名稱臺中類芽孢桿菌種屬:Paenibacillus│taichungensis分離基物:沉積物/深海沉積物

Human SSA(Sjogren syndrome antigen A) ELISA Kit資源名稱孤島海桿菌種屬:Marinobacter│gudaonensis分離基物:水樣/深層海水

Human SSB(Lupus La protein) ELISA Kit資源名稱耐重金屬貪銅菌種屬:Cupriavidus│metallidurans分離基物:沉積物/表層沉積物

Human α-GST(α-glutathione S-transferases) ELISA Kit資源名稱橙色鹽單胞菌種屬:Halomonas│lutea分離基物:沉積物/土黃色沉積物5-10cm

Human P2(Caspase-2) ELISA Kit資源名稱伸長鹽單胞菌種屬:Halomonas│elongata分離基物:生物樣/曬鹽廠設備表面

Human Acyl-CoA desaturase(delta-9-desaturase) ELISA Kit資源名稱橄欖產色鏈霉菌種屬:Streptomyces│olivochromogenes分離基物:土壤/近海紅樹林土壤

Human Fatty Acid desaturase 1(delta-5-desaturase) ELISA Kit資源名稱印度洋海洋螺菌種屬:Marispirillum│indicum分離基物:水樣/深海底層水樣

Human DEGS2(delta-4-desaturase) ELISA Kit資源名稱拉布倫茨氏菌種屬:Labrenzia│sp.分離基物:沉積物/深海沉積物

Human Total HSP-90(Heat Shock Protein 90 total) ELISA Kit資源名稱賴氨酸芽孢桿菌種屬:Lysinibacillus│macroides分離基物:沉積物/深海沉積物
轉基因品系番茄BioScien PCR試劑盒MAP activator with WD repeats|MAWD|PT WD|STRAP|UNR interacting protein|UNRIP|WD 40 repeat protein PT WD形態(tài)特性  梭形,胞突呈分枝狀，常有大小粗細不等的胞突　生長特性 貼壁生長　特征特性  LⅡ瘤株在615小鼠皮下移植后，取脾臟原代培養(yǎng)，傳20代后鑒定：細胞呈多角形、梭形及不規(guī)則形，胞突呈分枝狀，常有大小粗細不等的胞突；經(jīng)鑒定證明是小鼠樹突狀肉瘤細胞；615小鼠皮下移植成瘤。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%CS　

EIEE4|MUNC18 1|N Sec1|p67|Protein unc 18 homolog 1|Protein unc 18 homolog A|RBSEC1|STXBP1|syntaxin binding protein 1|Unc 18A|UNC18|Unc18 1|UNC18A形態(tài)特性  上皮樣　生長特性 貼壁生長　特征特性  2003年建系，利用Ca761皮下移植瘤組織進行原代培養(yǎng)、傳代、鑒定后建立。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

IFI6|Interferon alpha-inducible protein 6|Interferon-induced protein 6-16(Ifi-6-16)|G1P3|FAM14C|IFI-6-16|6-16|IFI616形態(tài)特性  成纖維細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性   培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

REG3α(Regenerating Islet Derived Protein 3 Alpha)|Lithostathine 3|PAP2|REG3A|hepatocarcinoma-intestine-pancreas|HIPpancreatitis-associated protein|Human proislet peptide|pancreatic beta cell growth factor|Pancreatitis-associated protein 1|PAP homologous protein|PAPPAP-H|PBCGF|proliferation-inducing protein 34|proliferation-inducing protein 42|Reg III-alpha|REG3|REG-3-alpha|REG-III形態(tài)特性  上皮樣生長特性 貼壁生長特征特性  1979年5月建系；取自T739近交系小鼠自發(fā)型肺腺癌。原代培養(yǎng)建系，24小時細胞開始生長，傳代45天,上皮樣圓形細胞，貼壁生長 ，T739、615、Km小鼠皮下移植成功；T739小鼠肺轉移。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

TBXAS1(Thromboxane-A synthase)|CYP5|CYP5A1|TXA synthase|TXAS|Cytochrome P450 5A1|TS|TXS|THAS|CYP5A1|GHOSAL|BDPLT14形態(tài)特性  成纖維細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞派源自于 L-M(TK-)，表達5HT1Dβ受體。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

SUMO1形態(tài)特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  該細胞是用人間充質干細胞免疫小鼠后取脾細胞與Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細胞融合而成的雜交瘤細胞；產生抗人間充質干細胞的單克隆抗體；IgG1型；與骨髓來源的間充質干細胞起反應。該細胞在異十八烷處理的BALB/c小鼠中可形成腹水。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  20%FBS　

FKBP8|Rotamase|FKBPR38|38 kDa FK506-binding protein|38 kDa FKBP|FKBP-38|hFKBP38|FK506-binding protein 8|FKBP-8|peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP8|PPIase FKBP8形態(tài)特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  SH3該細胞是用人間充質干細胞免疫小鼠后取脾細胞與Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細胞融合而成的雜交瘤細胞；產生抗人間充質干細胞的單克隆抗體；IgG2b型；與骨髓來源的間充質干細胞及部分間質來源組織起反應。該細胞在異十八烷處理的BALB/c小鼠中可形成腹水。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  15%FBS

ARG1(Arginase-1)|Liver Arginase|Liver-type arginase|Type I arginase形態(tài)特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  雜交瘤細胞，用BM10-37小鼠CTL細胞克?。笻-2 Kb）免疫美國倉鼠，取脾細胞與Sp2/0-Ag14 骨髓瘤細胞融合得到；抗小鼠CD3，IgG型。 培養(yǎng)條件  IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium  10%FBS；4mM L-glutamine