使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)zein基因染料法PCR試劑盒
貨號:CP96938
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)zein基因染料法PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human FAM214A(Protein FAM214A) ELISA Kit資源名稱九州蟲草種屬:Cordyceps│kyusyuensis A. Kawam.分離基物:九州蟲草標(biāo)本

Human PTGDR(Prostaglandin D2 receptor) ELISA Kit資源名稱紅菇蠟傘種屬:Hygrophorus│russula (Schaeff.) Kauffman分離基物:子實體

Human ABCA7(ATP-binding cassette sub-family A member 7) ELISA Kit資源名稱炭疽芽孢桿菌種屬:Bacillus anthracis Cohn分離基物:果實皮層

Human PLEKHO1(Pleckstrin homology domain-containing family O member 1) ELISA Kit資源名稱仙臺鏈霉菌種屬:Streptomyces│sindenensis Nakazawa and Fujii分離基物:喜樹

Human GALC(Galactocerebrosidase) ELISA Kit資源名稱羊毛狀青霉種屬:Penicillium│lanosum Westling分離基物:樟子松根系土壤

Human SERPINB13(Serpin B13) ELISA Kit資源名稱蹄形干酪菌種屬:Tyromyces│lacteus (Fr.) Murrill分離基物:闊葉樹樹枝

Human TTPAL(Alpha-tocopherol transfer protein-like) ELISA Kit資源名稱梓鏈格孢種屬:Alternaria│catalpae (Ellis & Mont.) P. Joly分離基物:梓樹葉部

Human HSPE1(10 kDa heat shock protein, mitochondrial) ELISA Kit資源名稱櫻桃鏈格孢種屬:Alternaria│cerasi Potebnia分離基物:榆葉梅葉部

Human LIG3(DNA ligase 3) ELISA Kit資源名稱薔薇生鏈格孢種屬:Alternaria│rosicola (V.G. Rao) T.Y. Zhang & Y.L. Guo分離基物:玫瑰葉部

Human C1S(Complement C1s subcomponent) ELISA Kit資源名稱萬壽菊鏈格孢種屬:Alternaria│tagetica S.K. Shome & Mustafee分離基物:萬壽菊葉部

Human PGLYRP2(N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase) ELISA Kit資源名稱向日葵鏈格孢種屬:Alternariaster│helianthi (Hansf.) E.G. Simmons分離基物:向日葵葉部

Human COLEC11(Collectin-11) ELISA Kit資源名稱絲軸黑粉菌種屬:Sphacelotheca│reiliana (J.G. Kühn) G.P. Clinton分離基物:玉米

Human CNTN1(Contactin-1) ELISA Kit資源名稱角鱗灰鵝膏菌種屬:Amanita│spissacea S. Imai分離基物:紅椎樹下

Human MCTS1(Malignant T cell-amplified sequence 1) ELISA Kit資源名稱致病疫霉種屬:Phytophthora│infestans (Mont.) de Bary分離基物:馬鈴薯葉片

Human SLC25A4(ADP/ATP translocase 1) ELISA Kit資源名稱點枝頂孢種屬:Acremonium│strictum W. Gams分離基物:非洲菊葉部

Human ALDH4A1(Delta-1-pyrroline-5-carboxylate dehydrogenase, mitochondrial) ELISA Kit資源名稱茄類鐮刀菌種屬:Haematonectria│haematococca (Berk. & Broome) Samuels & Rossman分離基物:根腐病

Human NFE2L1(Nuclear factor erythroid 2-related factor 1) ELISA Kit資源名稱長根靜灰球菌種屬:Bovistella│radicata (Durieu & Mont.) Pat.分離基物:子實體

Human CHAD(Chondroadherin) ELISA Kit資源名稱豹斑毒鵝膏菌種屬:Amanita│pantherina (DC.) Krombh.分離基物:馬尾松下

Human YIF1B(Protein YIF1B) ELISA Kit資源名稱亞拉巴馬全緣孔菌種屬:Pachykytospora│alabamae (Berk. & Cooke) Ryvarden分離基物:子實體

Human DMD(Dystrophin) ELISA Kit資源名稱斑點嗜藍(lán)孢孔菌種屬:Fomitiporia│punctata (Fr.) Murrill分離基物:子實體
玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)zein基因染料法PCR試劑盒SOST(Sclerostin)|VBCHsclerosteosis形態(tài)特性  成肌細(xì)胞生長特性 貼壁生長特征特性  肌成纖維基質(zhì)細(xì)胞株, WPMY-1, 與RWPE-1 cells (ATCC CRL-11609)一樣，來源于同一張成人前列腺組織切片的周圍區(qū)域的基質(zhì)細(xì)胞。 通過一個pRSTV質(zhì)料結(jié)構(gòu)，用SV40大T抗原對基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行永生化。 WPMY-1細(xì)胞，與RWPE-1細(xì)胞及其它上皮細(xì)胞衍生株一樣，屬于來源于同一個前列腺的一系列細(xì)胞株。 由于它們來源于同一個前列腺的周圍區(qū)域，WPMY-1細(xì)胞株對于研究分泌和基質(zhì)與上皮細(xì)胞相互作用尤其有用。 據(jù)提供者報道，來源于同一個前列腺的RWPE-1細(xì)胞株(ATCC CRL-1 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，5%

Cytoplasmic aconitate hydratase|Aconitase|Citrate hydro-lyase|Ferritin repressor protein|Iron regulatory protein 1|IRP1|Iron-responsive element-binding protein 1|IRE-BP 1|ACO1|IREB1形態(tài)特性  上皮細(xì)胞生長特性 貼壁生長特征特性  THLE-2 (ATCC CRL-10149 和 THLE-3 (ATCC CRL-11233)細(xì)胞系是正常肝細(xì)胞用SV40大T抗原轉(zhuǎn)染得到。 將含有SV40 T抗原的Bgl I-Hpa I片段的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入兼嗜性包裝細(xì)胞株P(guān)A317中生產(chǎn)病毒。 THLE-2 and THLE-3表達(dá)正常成人肝上皮細(xì)胞特征性的表型。 當(dāng)注射到無胸腺裸鼠中時，它們不成瘤，具有接近二倍體的核型，不表達(dá)甲胎蛋白。 THLE-2 and THLE-3將benzo[a]pyrene, N-nitrosodimet 培養(yǎng)條件   Clonetics Corporation, Walkersville, MD 21793的BEGM培養(yǎng)基(目錄號CC3170)。 套裝包含了500毫升基本培養(yǎng)基及分別凍存的添加劑，我們不用其中的GA和Epinephrine但另外添加了5 ng/ml EGF, 70 ng/ml Phosphoethanolamine。

STAT5A(Signal Transducer and Activator of Transcription 5A)|MGF|STAT5形態(tài)特性  上皮細(xì)胞生長特性 貼壁生長特征特性  293細(xì)胞株插入SV40 T-抗原的溫度敏感基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生株稱為293T。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

STAT3(Signal Transducer and Activator of Transcription 3)|Acute-phase response factor|APRFMGC16063|DNA-binding protein APRF|HIES形態(tài)特性  上皮細(xì)胞生長特性 貼壁生長特征特性  這株細(xì)胞是正常膀胱組織用SV40病毒轉(zhuǎn)染建株的。 反復(fù)用非洲綠猴腎細(xì)胞平板測試檢測傳染性SV40的生成，結(jié)果都呈陰性。 脅迫（如曝露于化學(xué)試劑）下可能激活病毒。 ATCC還有一株化學(xué)轉(zhuǎn)化的成瘤細(xì)胞株，MC-SV-HUC T2，目錄號為CRL-9519。 培養(yǎng)條件  F12K  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

SHH|Shh|HHG1|HHG-1|HLP3|HPE3|SMMCIsonic hedgehog homolog(Drosophila)|sonic hedgehog|sonic hedgehog homolog|sonic hedgehog protein|TPT|TPTPS形態(tài)特性  上皮樣；多角　生長特性 貼壁生長特征特性  293細(xì)胞是由腺病毒5型（Ad5）DNA轉(zhuǎn)化原代人胚腎獲得的細(xì)胞系。該細(xì)胞對人的腺病毒尤其敏感，能受納高水平的腺病毒DNA。含有5型腺病毒的基因，且能高效表達(dá)。此外，293細(xì)胞的染色體數(shù)目以亞三倍體（hypotriploid）占多數(shù)，主流數(shù)為64條（30%），高倍體為4.2%。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

NFKBIA|IkB? alpha|MAD-3|I-kappa-B-alpha|NF-kappa-B inhibitor alpha|MAD3|Major histocompatibility complex enhancer-binding protein MAD3|NFKBI形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  該細(xì)胞是 J.V.Melo從一位63歲患有套細(xì)胞淋巴瘤白人女性外周血中分離建立的，經(jīng)EBV介導(dǎo)獲得永生化，該細(xì)胞表達(dá)p16和細(xì)胞周期蛋白D2,低水平表達(dá)細(xì)胞周期蛋白D1?！? 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

ApoC3(Apolipoprotein C3)|APOC3|ApoC-III|MGC150353|Apo-CIII|APOCIII|apoC-III形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

PDGFD(Platelet Derived Growth Factor D)|IEGFMSTP036|Iris-expressed growth factor|PDGF-D|SCDGF-BMGC26867|spinal cord derived growth factor B形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS