實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系大豆W62染料法qPCR試劑盒
貨號:CP96980
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。

以下是轉(zhuǎn)基因品系大豆W62染料法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human HO2(Heme Oxygenase 2) ELISA Kit資源名稱沙門氏菌種屬:Salmonella│sp.提供形式:其他

Human HSF2(Heat Shock Transcription Factor 2) ELISA Kit資源名稱埃森沙門氏菌種屬:Salmonella│essen提供形式:其他

Human HSP-70(Heat Shock Protein 70) ELISA Kit資源名稱馬流產(chǎn)沙門氏菌種屬:Salmonella│abortus-equi提供形式:凍干物

Human HSPG(Heparan Sulfate Proteoglycan) ELISA Kit資源名稱湯卜遜沙門氏菌柏林變種種屬:Salmonella│thompson var.berlin提供形式:凍干物

Human HSPβ6/HSP-20(Heat Shock Protein Beta 6) ELISA Kit資源名稱維爾肖沙門氏菌種屬:Salmonella│virchow提供形式:凍干物

Human HYOU1(Hypoxia Up Regulated 1) ELISA Kit資源名稱杜塞爾多夫沙門氏菌種屬:Salmonella│duesseldorf提供形式:凍干物

Human IAP(Integrin Associated Protein) ELISA Kit資源名稱塔拉哈西沙門氏菌種屬:Salmonella│tallahassee提供形式:凍干物

Human IAP(immunosuppressive acidic protein) ELISA Kit資源名稱爪哇那沙門氏菌種屬:Salmonella│javiana提供形式:凍干物

Human IER3(Immediate Early Response 3) ELISA Kit資源名稱厄班那沙門氏菌種屬:Salmonella│urbana提供形式:凍干物

Human IFABP/FABP2(Intestinal Fatty Acid Binding Protein) ELISA Kit資源名稱阿德萊德沙門氏菌種屬:Salmonella│adelaide提供形式:凍干物

Human IFN-α(Interferon Alpha) ELISA Kit資源名稱韋克羅斯沙門氏菌種屬:Salmonella│waycross提供形式:凍干物

Human IgA1(Immunoglobulin A1) ELISA Kit資源名稱維斯拉哥沙門氏菌種屬:Salmonella│weslaco提供形式:凍干物

Human IgA2(Immumoglobulin A2) ELISA Kit資源名稱鼠傷寒沙門氏菌賓斯變種種屬:Salmonella│typhimurium var.binns提供形式:凍干物

Human IGF2BP3(Insulin Like Growth Factor 2 mRNA Binding Protein 3) ELISA Kit資源名稱海德爾堡沙門氏菌種屬:Salmonella│heidelberg提供形式:凍干物

Human IGF2R(Insulin Like Growth Factor 2 Receptor) ELISA Kit資源名稱阿邦尼沙門氏菌種屬:Salmonella│abony提供形式:凍干物

Human IGFALS(Insulin Like Growth Factor Binding Protein, Acid Labile Subunit) ELISA Kit資源名稱豬傷寒沙門氏菌武達森變種種屬:Salmonella│typhi-suis var.voldagsen提供形式:凍干物

Human IgG1(Immunoglobulin G1) ELISA Kit資源名稱波茨坦沙門氏菌種屬:Salmonella│potsdam提供形式:凍干物

Human IgG2(Immunoglobulin G2) ELISA Kit資源名稱慕尼黑沙門氏菌種屬:Salmonella│muenchen提供形式:凍干物

Human IgG3(Immunoglobulin G3) ELISA Kit資源名稱羅斯托克沙門氏菌種屬:Salmonella│rostock提供形式:凍干物

Human IgG4(Immunoglobulin G4) ELISA Kit資源名稱莫斯科沙門氏菌種屬:Salmonella│moscow提供形式:凍干物
轉(zhuǎn)基因品系大豆W62染料法qPCR試劑盒Glucose phosphomutase 1|PGM 1|PGM1|phosphoglucomutase 1形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  這株細胞來源于原發(fā)性透明細胞腺癌。細胞呈邊界不清楚的球形，高核質(zhì)比，有微絨毛和橋粒?？梢栽谲洯傊猩L。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

UBE2A|RAD6A|UBE2A|HHR6A|HR6A|RAD6 homolog A|UBC2|Ubiquitin carrier protein A|ubiquitin-conjugating enzyme E2 A|Ubiquitin-protein ligase A形態(tài)特性  混合形生長特性 貼壁生長特征特性  注意： 據(jù)報道來自不同個體的膠質(zhì)母細胞瘤細胞株U-118 MG (HTB-15) 和 U-138 MG (HTB-16)有著一致的VNTR和相近的STR模式。 U-118 MG 和 U-138 MG細胞遺傳學(xué)上很相似并有至少六個衍生標(biāo)記染色體。 這是1966年至1969年間J. Ponten和同事從惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤中構(gòu)建的細胞株中的一株(其它包括ATCC HTB-14和 ATCC HTB-16 and ATCC HTB-17)。 1987年用BM-Cycline培養(yǎng)6周去除了支原體污染。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

PHD2形態(tài)特性  上皮樣；多角生長特性 貼壁生長特征特性   培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

MUSK(Muscle Skeletal Receptor Tyrosine Kinase)|Muscle-specific Receptor Tyrosine Kinase|muscle|skeletal|receptor tyrosine kinase|skeletal receptor tyrosine-protein kinase形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞源自一名58歲患有膀胱移行細胞癌的白人男性。胞內(nèi)無橋粒，有大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及突出絨毛，表達ras基因。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

C20orf104|GLEA2|Glioma expressed antigen 2|HCA58|Novel zinc finger protein|NZF|PHD finger protein 20|PHF20|Transcription factor TZP|TZP形態(tài)特性  上皮樣；多角　生長特性 貼壁生長特征特性  1974年A. Leibovitz從期移行細胞瘤中建立了SW細胞株。 患者接受過術(shù)前化療(Thiotepa)。 報道稱此細胞的植板率為41%。 培養(yǎng)條件  L15: Leibovitz Medium  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

AMACR|AMACRD|CBAS4|RACE|RM|2-methylacyl-CoA racemase|alpha-methylacyl-CoA racemase|形態(tài)特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  COC1細胞建系于1993年（熊世鋼等）。細胞于原代培養(yǎng)至第17天傳代，以后反復(fù)傳代，生物學(xué)特性穩(wěn)定?？杀磉_多種腫瘤標(biāo)志物和野生型P53蛋白、突變型P53蛋白。裸鼠接種產(chǎn)生分化差的腺癌。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

LRP8(Low-density lipoprotein receptor-related protein 8)|APOER2|LRP-8|Apolipoprotein E receptor 2|Lr8b|MCI1|Apolipoprotein E R2形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  Z初認為這個細胞源自喉上皮癌，但隨后通過同工酶分析、HeLa標(biāo)記染色體和DNA指紋分析發(fā)現(xiàn)，該細胞已被HeLa污染；角蛋白陽性。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

p110 BETA|PI3 Kinase p110 beta|PI3 kinase subunit beta|PI3K|PI3K beta|PI3K p110(beta)|PI3Kbeta|PI3KCB|PIK3C1|PIK3CB|PtdIns 3 kinase subunit beta形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長　特征特性  該細胞來源于一名15歲的白人少年的肝癌組織。該細胞表達甲胎蛋白、白蛋白、α-2-巨球蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、轉(zhuǎn)鐵蛋白、α-1-抗凝乳蛋白酶、結(jié)合珠蛋白、銅藍蛋白、纖溶酶原、補體C4、C3激活物、纖維蛋白原、α-1酸性糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、β-脂蛋白、視黃醇結(jié)合蛋白；表達胰島素受體和胰島素樣生長因子IGFⅡ的受體；該細胞具有3-羥基-3-甲酰輔酶A還原酶和肝甘油三酯脂肪酶的活性。目前尚未證明該細胞中有HBV基因組。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS