參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系大豆W98 PCR試劑盒
貨號:CP96982
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽性對照。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

以下是轉(zhuǎn)基因品系大豆W98 PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human LTA(lipoteichoic acids) ELISA Kit資源名稱隆格沙門氏菌種屬:Salmonella│loenga提供形式:凍干物

Human LpPLA2(Phospholipase A2, Lipoprotein Associated) ELISA Kit資源名稱金加瓦沙門氏菌種屬:Salmonella│kingabwa提供形式:凍干物

Human LTA4H(Leukotriene A4 Hydrolase) ELISA Kit資源名稱弗雷斯諾沙門氏菌種屬:Salmonella│fresno提供形式:凍干物

Human LTβ(Lymphotoxin Beta) ELISA Kit資源名稱沃遜納爾沙門氏菌種屬:Salmonella│wassenaar提供形式:凍干物

Human LTβR(Lymphotoxin Beta Receptor) ELISA Kit資源名稱霍格雷威沙門氏菌種屬:Salmonella│hooggraven提供形式:凍干物

Human LZMg(Lysozyme G) ELISA Kit資源名稱奎寧拉沙門氏菌種屬:Salmonella│quiniela提供形式:凍干物

Human M-AChR(Muscarinic Acetylcholine Receptor) ELISA Kit資源名稱布魯克菲爾德沙門氏菌種屬:Salmonella│brookfield提供形式:凍干物

Human MAG Ab(Anti-Myelin Associated Glycoprotein Antibody) ELISA Kit資源名稱賓寧根沙門氏菌種屬:Salmonella│binningen提供形式:凍干物

Human MAN1A1(Mannosidase Alpha Class 1A Member 1) ELISA Kit資源名稱蒂爾加登沙門氏菌種屬:Salmonella│tiergarten提供形式:凍干物

Human MANF(Mesencephalic Astrocyte Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit資源名稱科季沙門氏菌種屬:Salmonella│coogee提供形式:凍干物

Human MAPK(Mitogen Activated Protein Kinase) ELISA Kit資源名稱布尼克沙門氏菌種屬:Salmonella│bunnik提供形式:凍干物

Human MCSFR(Macrophage Colony Stimulating Factor Receptor) ELISA Kit資源名稱克羅斯尼斯沙門氏菌種屬:Salmonella│crossness提供形式:凍干物

Human MCSP(Melanoma Associated Chondroitin Sulfate Proteoglycan) ELISA Kit資源名稱浦那沙門氏菌三相變種種屬:Salmonella│poona var.triph提供形式:凍干物

Human MT(Melatonin) ELISA Kit資源名稱香潘沙門氏菌種屬:Salmonella│champaign提供形式:凍干物

Human MFAP4(Microfibrillar Associated Protein 4) ELISA Kit資源名稱嬰兒沙門氏菌種屬:Salmonella│infantis提供形式:凍干物

Human MFI2(Melanotransferrin) ELISA Kit資源名稱威奇塔沙門氏菌種屬:Salmonella│wichita提供形式:凍干物

Human MGL(Monoacylglycerol Lipase) ELISA Kit資源名稱三河島沙門氏菌種屬:Salmonella│mikawasima提供形式:凍干物

Human MGST1(Microsomal Glutathione S Transferase 1) ELISA Kit資源名稱拘櫞酸桿菌種屬:Citrobacter│sp.提供形式:凍干物

Human MHCC/HLA-C(Major Histocompatibility Complex Class I C) ELISA Kit資源名稱阿柏丁沙門氏菌種屬:Salmonella│aberdeen提供形式:凍干物

Human MHCG(Major Histocompatibility Complex Class I G) ELISA Kit資源名稱山夫登堡沙門氏菌種屬:Salmonella│senftenberg提供形式:凍干物
轉(zhuǎn)基因品系大豆W98 PCR試劑盒PON3(Paraoxonase 3)|paraoxanase-3|Serum paraoxonase|lactonase 3形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  SPC-A1是一株常用的肺癌細(xì)胞系，也被用于肺癌發(fā)病機(jī)理和抗腫瘤藥物的體外研究試驗(yàn)研究。具有典型的上皮細(xì)胞狀形態(tài)結(jié)構(gòu)。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

C15|onzin|PLAC8|placenta 8|Protein C15形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  HUT 102是一株T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系。該細(xì)胞具有成熟T細(xì)胞系的特征，細(xì)胞表面呈現(xiàn)IL-2活性，E花環(huán)陽性，表面免疫球蛋白、EBV核抗原和TdT（Terminal deoxyribonucleotidyl-transferase）反應(yīng)陰性。該細(xì)胞系還可釋放與T細(xì)胞淋巴瘤相關(guān)的單一C型逆轉(zhuǎn)病毒（retrovirus），即HTLVI病毒。  培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

RNase 7(Ribonuclease 7)|RNASE7|SAP-2|Skin-derived antimicrobial protein 2形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  Hela/DDP細(xì)胞是湖醫(yī)二院腫瘤所陳惠楨教授等用藥物劑量增選法篩選獲得的Hela細(xì)胞耐藥亞株。該細(xì)胞除耐順鉑（DDP）外，其它特性均與Hela細(xì)胞系相似，可用于常規(guī)的耐藥研究。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS　

P47|Platelet 47 kDa protein|pleckstrin|PLEK形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  COC1/DDP細(xì)胞是陳惠楨教授等用藥物劑量增選法篩選獲得的COC1細(xì)胞耐藥亞株。COC1/DDP對順鉑（DDP 1μg/ml）的耐受性是親本株（COC1細(xì)胞）的6.5倍，同時(shí)，對卡鉑（CBD-CA），絲素C（MMC）也具有不同程度的交叉耐受性。可用于卵巢腫瘤治療的體外試驗(yàn)研究。  培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

IL37(Interleukin-37)|FIL1 zeta|IL-1F7|FIL1|FIL1(ZETA)|FIL1Z|IL1H4|IL1F7|IL-1H4|IL-1F7b|IL-1H|IL-1RP1|IL-1X protein|IL1RP1|interleukin 1 family member 7|IL-1X|interleukin 1 family|member 7(zeta)|interleukin 1|zeta|interleukin-1 family member 7|Interleukin-1 homolog 4|interleukin-1 superfamily z|Interleukin-1 zeta|Interleukin-1-related protein形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長　特征特性  取人肝癌組織，采用靜置和旋轉(zhuǎn)管法培養(yǎng)11天細(xì)胞開始生長，傳代23天。AFP陽性。用Northern blot方法，未能檢測到細(xì)胞中1.3kb LFIRE-1/HFREP-1 mRNA的表達(dá)，免疫缺陷小鼠體內(nèi)可成瘤。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

LDLR(Low-density lipoprotein receptor)|FH|FHC|LDL receptor|LDLCQ2|low density lipoprotein receptor|low-density lipoprotein receptor class A domain-containing protein 3形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長　特征特性  SW480源自一位51歲白人男性患者的原位直腸腺癌，而SW620源自同一病人一年后的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶。 該細(xì)胞CSAp和直腸抗原3陰性；角蛋白陽性；p53基因第273位密碼子的G →A突變引起Arg→His替代，309位密碼子的C→T突變導(dǎo)致Pro→Ser替代；細(xì)胞p53蛋白表達(dá)水平升高；癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis 和fos的表達(dá)呈陽性；未檢測到癌基因N-myc的表達(dá)；不表達(dá)Matrilysin（一種與腫瘤侵襲相關(guān)的金屬蛋白酶）。有報(bào)道稱該細(xì)胞表達(dá)GM-CSF。ras 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

VLDLR(Very low-density lipoprotein receptor)|CHRMQ1|VLDLRCH|CARMQ1|very low density lipoprotein receptor|VLDL receptor|VLDL-R形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  ACC-M細(xì)胞是ACC-2細(xì)胞系經(jīng)體內(nèi)外不斷選擇獲得的肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株（ACC-2不形成肺轉(zhuǎn)移），其裸鼠體內(nèi)肺轉(zhuǎn)移率達(dá)96%。該細(xì)胞株除保留了上皮和腺源性的特性外，體外生長能力大大增強(qiáng)。已證明該細(xì)胞株是建立肺高轉(zhuǎn)移性裸鼠模型的佳材料。  培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

KRT6A(Keratin|type II cytoskeletal 6A)|K6A|CK-6A|CK-6D|Type-II keratin Kb6|Keratin-6A|Cytokeratin-6A|Cytokeratin-6D|KRT6D形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  Tca-8113源于原位舌鱗癌的活檢組織；組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)7天開始生長，傳代71天，已傳160代；傳代時(shí)間為38小時(shí)；傳代第3天有絲分裂指數(shù)為61%，移植效率為86%，軟瓊脂克隆生成率為53%~57.7%。免疫抑制的C57BL/6和ICR幼小鼠皮下移植成功；電鏡和組化特征與鱗癌相符。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS