使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系番茄331N染料法qPCR試劑盒
貨號:CP96992
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
?實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是轉(zhuǎn)基因品系番茄331N染料法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human RB1(Retinoblastoma Protein 1) ELISA Kit資源名稱乙酰微小桿菌種屬:Exiguobacterium acetylicum分離基物:Creamy waste

Human RBP3(Retinol Binding Protein 3, Interstitial) ELISA Kit資源名稱金色鏈霉菌種屬:Streptomyces│aureus提供形式:凍干物

Human RCN1(Reticulocalbin 1) ELISA Kit資源名稱酸瘡痂鏈霉菌種屬:Streptomyces acidiscabies分離基物:馬鈴薯瘡痂

Human REG1α(RegeneRating Islet Derived Protein 1 Alpha) ELISA Kit資源名稱柯恩氏菌種屬:Cohnella│sp.分離基物:土壤

Human REG1β(RegeneRating Islet Derived Protein 1 Beta) ELISA Kit資源名稱臘狀芽孢桿菌種屬:Bcillus│cereus提供形式:凍干物

Human REPIN1(Replication Initiator 1) ELISA Kit資源名稱甲型副傷寒沙門菌種屬:Salmonella│paratyphi A分離基物:血

Human RIPK2(Receptor TNFRSF Interacting Serine Threonine Kinase 2) ELISA Kit資源名稱結(jié)核分枝桿菌種屬:Mycobacterium│tuberculosis提供形式:凍結(jié)物

Human RLN2(Relaxin-2) ELISA Kit資源名稱反芻雙歧桿菌種屬:Bifidobacterium│ruminantium分離基物:bovine rumen

Human RNASE(Ribonuclease) ELISA Kit資源名稱羅伊氏短芽孢桿菌種屬:Brevibacillus│reuszeri提供形式:凍干物

Human RNASEN(Ribonuclease III, Nuclear) ELISA Kit資源名稱藤倉赤霉原變種（斜面）種屬:Gibberella fujikuroi var. fujikuroi提供形式:只提供斜面

Human RNASET2(Ribonuclease T2) ELISA Kit資源名稱密粘褶菌（斜面）種屬:Gloeophyllum trabeum提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human RPS6Kβ1(Ribosomal Protein S6 Kinase Beta 1) ELISA Kit資源名稱噬菌蛭弧菌種屬:Bdellovibrio│bacteriovorus分離基物:油藏采出液

Human rT3(Reverse Triiodothyronine) ELISA Kit資源名稱貝萊斯芽孢桿菌種屬:Bacillus│velezensis分離基物:土壤

Human RTN4(Reticulon 4) ELISA Kit資源名稱噬幾丁質(zhì)菌種屬:Chitinophaga│sancti分離基物:土壤

Human RXFP1(Relaxin/Insulin Like Family Peptide Receptor 1) ELISA Kit資源名稱淤泥假單胞菌種屬:Pseudomonas│caeni分離基物:厭氧氨氧化反應(yīng)器的污泥

Human S100A13(S100 Calcium Binding Protein A13) ELISA Kit資源名稱黑柄炭角菌種屬:Xylaria│nignipes提供形式:凍干物

Human SAA2(Serum Amyloid A2) ELISA Kit資源名稱日本蟲草廣東變型種屬:Cordyceps│japonica f. guangdongensis提供形式:凍干物

Human Salusin α(Salusin Alpha) ELISA Kit資源名稱魚腥藍(lán)細(xì)菌種屬:Anabaena│sp.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human sCD14(Soluble Cluster of Differentiation14) ELISA Kit資源名稱隱藏嗜酸菌種屬:Acidiphilium│cryptumy1分離基物:生物除臭塔

Human TRACP-5b(TartRate-resistant Acid Phosphatase 5b) ELISA Kit資源名稱犬小孢子菌種屬:Microsporum│canis分離基物:皮膚組織
轉(zhuǎn)基因品系番茄331N染料法qPCR試劑盒HMGCR(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase)|HMG-CoA reductase形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

REDD1形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

IFI35(Interferon-induced 35 kDa protein)|IFP 35|Ifi-35形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

RGS1(Regulator of G-protein signaling 1)|1R20|BL34|IER1|B-cell activation protein BL34|Early response protein 1R20形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

RGS2形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

APOA1BP|AIBP|YJEFN1|YjeF_N1|AI-BP|YjeF N-terminal domain-containing protein 1|Apolipoprotein A-I-binding protein()|NAD(P)HX epimerase形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

RGS7形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

APOL1(Apolipoprotein L1)|APOL|Apo-L|ApoL-I|Apolipoprotein L|Apolipoprotein L-I形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS