使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：小麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)acc1基因PCR試劑盒
貨號:CP96907
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是小麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)acc1基因PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human NAA20(N-alpha-acetyltransferase 20) ELISA Kit資源名稱指狀青霉種屬:Penicillium digitatum提供形式:凍干粉

Human HIF1AN(Hypoxia-inducible factor 1-alpha inhibitor) ELISA Kit資源名稱三線鐮孢菌種屬:Fusariumtricinctum安全等級:1

Human SOX9(Transcription factor SOX-9) ELISA Kit資源名稱干酪乳桿菌種屬:Lactobacillus│casei分離基物:牙洞

Human DPP10(Inactive dipeptidyl peptidase 10) ELISA Kit資源名稱Naxibactervarians種屬:Naxibactervarians分離基物:90歲男性眼睛，挪威

Human AMD1(S-adenosylmethionine decarboxylase proenzyme) ELISA Kit資源名稱Lysinibacillusxylanilyticus種屬:Lysinibacillusxylanilyticus分離基物:森林腐殖質(zhì)，韓國雞龍山

Human SLC25A5(ADP/ATP translocase 2) ELISA Kit資源名稱菊糖芽孢乳桿菌種屬:Sporolactobacillus inulinus分離基物:雞飼料

Human NOTCH1(Neurogenic locus notch homolog protein 1) ELISA Kit資源名稱類紅紅細(xì)菌種屬:Catellibacteriumchanglense=Rhodobacterchanglensis安全等級:1

Human MIOX(Inositol oxygenase) ELISA Kit資源名稱牙齦卟啉單胞菌種屬:Porphyromonas gingivalis分離基物:人類齦溝

Human WISP3(WNT1-inducible-signaling pathway protein 3) ELISA Kit資源名稱匣狀粘球菌種屬:pyxidicoccusfallax安全等級:1

Human VKORC1(Vitamin K epoxide reductase complex subunit 1) ELISA Kit資源名稱孢囊桿菌種屬:CystobacterSP.安全等級:1

Human Carbamylated Albumin ELISA Kit資源名稱弱小珊瑚桿菌種屬:Corallococcusexiguous安全等級:1

Human UBQLN2(Ubiquilin-2) ELISA Kit資源名稱黃色粘球菌種屬:Myxococcusxanthus安全等級:1

Human GLRX3(Glutaredoxin-3) ELISA Kit資源名稱產(chǎn)堿假單胞菌種屬:Pseudomonasalcaligenes分離基物:游泳池水

Human TFAP2B(Transcription factor AP-2-beta) ELISA Kit資源名稱成團(tuán)腸桿菌(成團(tuán)泛菌)種屬:EnterobacteragglomeransEwingandFife安全等級:1

Human SULF2(Extracellular sulfatase Sulf-2) ELISA Kit資源名稱阪崎腸桿菌種屬:Enterobacter sakazakii提供形式:凍干粉

Human HBA1(Hemoglobin subunit alpha) ELISA Kit資源名稱棉花立枯菌種屬:Rhizoctoniasolani安全等級:1

Human STEAP1(Metalloreductase STEAP1) ELISA Kit資源名稱納地青霉種屬:Penicillium nalgiovense提供形式:凍干粉

Human PTTG2(Securin-2) ELISA Kit資源名稱香蕉枯萎病種屬:Fusariumoxysporum安全等級:1

Human PTTG1IP(Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein) ELISA Kit資源名稱蠟蚧輪枝孢菌種屬:Verticilliumlecanii安全等級:1

Human NUSAP1(Nucleolar and spindle-associated protein 1) ELISA Kit資源名稱痢疾志賀氏菌種屬:Shigelladysenteriae提供形式:凍干物
小麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)acc1基因PCR試劑盒Emmprin|CD147(Extracellular Matrix Metalloproteinase Inducer)|Basigin|BSG|5F7|CD147 antigen|Collagenase stimulatory factor|EMMPRINTCSF|Extracellular matrix metalloproteinase inducer抗生素檢定培養(yǎng)基5號用途：抗生素檢定培養(yǎng)基5號供兩性霉素B檢定菌種啤酒酵母培養(yǎng)用(中華人民共和國藥典2010版)。原理：

ApoB100(Apolipoprotein B100)|Apo-B100抗生素檢定培養(yǎng)基4號用途：抗生素檢定培養(yǎng)基4號用于兩性霉素B的效價及殘留的微生物學(xué)檢定(中華人民共和國藥典2010版)。原理：

sCD163(Soluble Cluster of Differentiation 163)|M130|MM130抗生素檢定培養(yǎng)基3號用途：抗生素檢定培養(yǎng)基3號用于慶大霉素效價的微生物學(xué)檢定及藤黃八疊球菌菌懸液制備(中華人民共和國藥典2010版)。原理：

CD169|SIGLEC1(Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 1)|Siglec?1|C19orf75|SIGLECL1 SIGLEC family like 1抗生素檢定培養(yǎng)基2號(高pH)用途：抗生素檢定培養(yǎng)基2號(高pH)用于磷霉素、大觀霉素、新霉素、羅紅霉素等效價及殘留的微生物學(xué)檢定(中華人民共和國藥典2010版)。原理：

CD200(OX-2 membrane glycoprotein)|CD200|MOX1|MOX2|MRC|OX-2|antigen identified by monoclonal MRC OX-2|CD200 antigenMOX1|CD200 molecule|MOX2MRC|MRC OX-2 antigen|OX-2|OX-2 membrane glycoprotein抗生素檢定培養(yǎng)基2號(低pH)用途：抗生素檢定培養(yǎng)基2號(低pH)用于四環(huán)素、土霉素、金霉素、氯霉素、桿菌肽等的效價及殘留的微生物學(xué)檢定(中華人民共和國經(jīng)典2010版)。原理：

CD21|CR2(Complement Receptor 2)抗生素檢定培養(yǎng)基1號(高pH)用途：抗生素檢定培養(yǎng)基1號(高pH)用于鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、紅霉素等效價及殘留的微生物學(xué)檢定(中華人民共和國藥典2010版)。原理：

FcεRII|CD23|CLEC4J|Fc epsilon RII|FCER2|Fcer2a|IGEBF|Ly-42|BLAST-2|CD23A|CD23CD23 antigen|CLEC4JC-type lectin domain family 4 member J|C-type lectin domain family 4|member J|Fc fragment of IgE|low affinity II|receptor for(CD23)|FCE2Fc fragment of IgE|low affinity II|receptor for(CD23A)|fc-epsilon-RII|Fc-epsilon-RII|IGEBF|Immunoglobulin E-binding factor|low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor|Lymphocyte IgE receptor抗生素檢定培養(yǎng)基1號(低pH)用途：抗生素檢定培養(yǎng)基1號(低pH)用于磺芐西林等效價的微生物學(xué)檢定(中華人民共和國藥典2010版)。原理：

PIVNP營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（藥典）用途：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于一般細(xì)菌總數(shù)測定，保存菌種及純培養(yǎng)。(《中華人民共和國藥典》2010年版)原理：