當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細胞培養(yǎng)>>原代細胞>> T25m2人心肌成纖維細胞說明
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱 | 人心肌成纖維細胞說明 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963727 |
人心肌成纖維細胞【Human Cardiac: Normal Cardiac Fibroblast Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。提供的細胞有標(biāo)準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務(wù)標(biāo)準。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Humanacidsphingomyelinase,ASMELISA試劑盒人酸性神經(jīng)鞘0脂酶(ASM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山梨酸 HPLC≥99% 250mg
Humanaconitase2,ACO-2ELISA試劑盒人烏頭酸酶2(ACO-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山麥冬皂苷B HPLC≥95% 20mg
HumanactivatedcoagulationfactorⅫ,FⅫa 人活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 山羊豆堿 HPLC≥98% 20mg
HumanActivatedLeukocyteCellAdhesionMolecule,ALCAMELISA試劑盒人白細胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山楂酸 HPLC≥98% 20mg
HumanActivinA,ACV-AELISA試劑盒人活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山梔苷 HPLC≥98% 20mg
Humanadaptormoleculeapoptoticpeptidaseactivatingfactor1,APAF1 人銜接蛋白酶活化因子1(APAF1)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 山梔苷甲酯 HPLC≥98% 20mg
Humanadaptormoleculeapoptoticpeptidaseactivatingfactor1,APAF1ELISA試劑盒人銜接蛋白酶活化因子1(APAF1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山梔子苷B HPLC≥98% 20mg
Humanadenosinedeaminase,ADA 人腺苷脫氨酶(ADA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 山茱萸苷 HPLC≥98% 20mg
Humanadenosinedeaminase,ADAELISA試劑盒人腺苷脫氨酶(ADA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山茱萸新苷 HPLC≥98% 20mg
HumanAdenovirusAigen,ADV-AgELISA試劑盒人腺病毒抗原(ADV-Ag)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山竹子素 HPLC≥95% 20mg
小鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)ELISA檢測試劑盒Mouseeosinophilchemotacticfactor,ECFELISAKit 96T/48T 筋骨草素G HPLC≥95% 20mg
人過氧化脂質(zhì)(LPO)試劑盒 Human lipid peroxide,LPO ELISA kit 筋骨草素L HPLC≥95% 20mg
RatEndotheliallipase,ELELISAKit大鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山苦草素A HPLC≥95% 20mg
5%ferricammoniumsulfate溶液500毫升 氯代筋骨草素 HPLC≥95% 20mg
MouseEsiol,E3ELISA試劑盒小鼠雌三醇(E3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 田薊苷 HPLC≥95% 20mg
小鼠維生素D3(VD3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 桑A HPLC≥95% 20mg
Rat osteopoin (OPN) ELISA Kit 大鼠骨橋素(OPN)ELISA試劑盒 楮樹黃酮醇B HPLC≥95% 20mg
HumanlumicanELISAKit 人基膜聚糖(lumican)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 桑根酮醇 L HPLC≥95% 20mg
ChickenIerleukin9,IL-9ELISA試劑盒雞白介素9(IL-9)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 新原莪述烯醇 HPLC≥95% 20mg
載玻片細胞INSULI-ALPHA蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 人參環(huán)氧炔醇 HPLC≥98% 20mg
人心肌成纖維細胞說明Rathypoxia-induciblefactor1α,HIF-1αELISAKit大鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山梔苷甲酯 HPLC≥98% 20mg
Rathypoxia-induciblefactor1α,HIF-1αELISA試劑盒大鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山梔苷 HPLC≥98% 20mg
RatiactParathormone,i-PTHELISAKit大鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山芝烯三醇 HPLC≥98% 5mg
RatiactParathormone,i-PTHELISA試劑盒大鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山楂酸,馬斯里酸 Maslinic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準品
Ratiduronatesulfatase,IDSELISA試劑盒大鼠艾杜糖酯酶(IDS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山楂酸 HPLC≥98% 20mg
Ratiercellularadhesionmolecule1,ICAM-1ELISAKit大鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山崳酸甲酯(標(biāo)準品) Methyl behenate 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準品
Ratiercellularadhesionmolecule1,ICAM-1ELISA試劑盒大鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山崳酸甲酯 GC≥99% 1g
Ratiercellularadhesionmolecule2,ICAM-2ELISAKit大鼠細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山崳酸(標(biāo)準品) Behenic acid 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準品
Ratiercellularadhesionmolecule2,ICAM-2ELISA試劑盒大鼠細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山羊豆堿 HPLC≥98% 20mg
Ratiercellularadhesionmolecule3,ICAM-3ELISAKit大鼠細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 山香二烯酸 HPLC≥98% 5mg
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