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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2人輸尿管上皮細(xì)胞說(shuō)明
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 人輸尿管上皮細(xì)胞說(shuō)明 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-963747 |
人輸尿管上皮細(xì)胞【Human Ureteral: Normal Ureteral Epithelial Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶(hù)可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿(mǎn)50ml左右*培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書(shū)及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶(hù)可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒(méi)有透氣孔的話(huà),瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
活體細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶12(PASE-12)活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒20 肉桂酰胺(>98%,BR) Cinnamamide 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
活體細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶13(PASE-13)活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒20 肉桂油 Cinnamon oil 質(zhì)量規(guī)格:工業(yè)級(jí)
活體細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-2(PASE-2)活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒20 檸檬醛(>95%,Pract Grade) Citral 質(zhì)量規(guī)格:>95%,Pract Grade
活體細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-3(PASE-3)活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒20 檸嗪酸(>98%,BR) Citrazinic acid 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
活體細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-4(PASE-4)活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒20 草酸鈷(>99%,BR) Cobalt (II) oxalate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
活體細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-5(PASE-5)活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒20 刀豆素A(> 95%,BR) Concanamycin A 質(zhì)量規(guī)格:> 95%,BR
活體細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-6(PASE-6)活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒20 化亞銅(>98%,BR) Copper(I) bromide 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
活體細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-7(PASE-7)活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒20 無(wú)水乙酸銅(>99%,BR) Copper(II) acetate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
活體細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-8(PASE-8)活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒20 化銅(>99%,BR) Copper(II) bromide 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
活體細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-9(PASE-9)活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒20 檸檬酸銅(>98.5%,BR) Copper(II) , hydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR
英文名稱(chēng)HumanMethylaseELISAKit人化酶(Methylase)規(guī)格:96T/48T 阿侖鈉 Alendronate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP
動(dòng)物肝星狀細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒5 阿侖鈉 Alendronate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Ratplatelet-derivedgrowthfactor-BB,PDGF-BBELISA試劑盒大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 別嘌醇 Allopurinol 質(zhì)量規(guī)格:>99%,超
小鼠拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ()ELISA試劑盒 ,英文名: ELISA Kit 別嘌醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Allopurinol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
兔血栓素B2(TXB2)ELISA檢測(cè)試劑盒RabbitThromboxaneB2,TX-B2ELISAKit 96T/48T 烯丙基雌醇;烯丙雌醇 Allylestrenol 質(zhì)量規(guī)格:含量≥98.0%
牛肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-II(CPT-II)試劑盒 Bovine carnitine palmitoylansferase II,CPT-II ELISA kit 烯丙基雌醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Allylestrenol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97.0%,標(biāo)準(zhǔn)品
英文名稱(chēng)HumanCKMBELISAKit人激動(dòng)異構(gòu)酶MB(CKMB)規(guī)格:96T/48T 前列地爾,前列腺素E1 Alprostadil,PGE1, 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR,USP30
動(dòng)物肝組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒10 四烯雌酮,烯丙孕素 Altrenogest 質(zhì)量規(guī)格:> 99%
RatpregnancyassociatedplasmaproteinA,PAPP-AELISA試劑盒大鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 四烯雌酮,烯丙孕素(標(biāo)準(zhǔn)品) Altrenogest 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠脫氧膠原交聯(lián)(DPD)ELISA試劑盒 ,英文名: DPD ELISA Kit 鹽酸金剛烷胺 Amantadine HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
人輸尿管上皮細(xì)胞說(shuō)明Ratmaixmetalloproteinase3,MMP-3ELISA試劑盒大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 瑞鮑迪甙B HPLC≥98% 5mg
Ratmaixmetalloproteinase4,MMP-4ELISAKit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 銳勁特(標(biāo)準(zhǔn)品) Fipronil 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%
Ratmaixmetalloproteinase4,MMP-4ELISA試劑盒大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 蕊木堿甲酯 HPLC≥98% 5mg
Ratmaixmetalloproteinase5,MMP-5ELISAKit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 朊病毒肽(106-126),人 Prion Peptide (106-126),Human 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
Ratmaixmetalloproteinase5,MMP-5ELISA試劑盒大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 軟脂酸谷甾醇酯 HPLC≥98% 5mg
Ratmaixmetalloproteinase7,MMP-7ELISAKit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 軟脂酸β香樹(shù)精酯 HPLC≥98% 5mg
Ratmaixmetalloproteinase7,MMP-7ELISA試劑盒大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 軟木花椒素 HPLC≥98% 5mg
Ratmaixmetalloproteinase8/Neuophilcollagenase,MMP-8ELISAKit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 軟海綿酸鈉(>95.0%,BC) Okadaic acid, salt 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%,BC
Ratmaixmetalloproteinase8/Neuophilcollagenase,MMP-8ELISA試劑盒大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 軟海綿酸(>95.0%,BC) Okadaic acid, free acid 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%,BC
Ratmaixmetalloproteinase9/GelatinaseB,MMP-9ELISAKit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/GelatinaseB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 軟骨素硫酸鈉鹽 500mg
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