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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞操作
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞【Human Lymph: Normal lymphatic Endothelial Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-963756 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
小鼠肌紅蛋白(MYO)ELISA試劑盒 ,英文名: MYO ELISA Kit 去氫鉤藤堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Corynoxeine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 去氫木香內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Dehydrocostus Lactone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒 ,英文名: MYO/MB ELISA Kit 染料木苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Genistin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌肌酸激酶(CKM)ELISA試劑盒 ,英文名: CKM ELISA Kit 人參二醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Panaxadiol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌腱蛋白X(TNX)ELISA試劑盒 ,英文名: TNX ELISA Kit 人參三醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Panaxatriol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌侵蛋白(MTPN)ELISA試劑盒 ,英文名: MTPN ELISA Kit 人參皂苷CK(標(biāo)準(zhǔn)品) Compound K 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌球蛋白(Myosin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 人參皂苷F1(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside F1 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌球蛋白(MYS)ELISA試劑盒 ,英文名: MYS ELISA Kit 人參皂苷F2(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside F2 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌球蛋白ⅠA(MYO1A)ELISA試劑盒 ,英文名: MYO1A ELISA Kit 人參皂苷Rb1(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Rb1 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌球蛋白ⅤA(MYO5A)ELISA試劑盒 ,英文名: MYO5A ELISA Kit 人參皂苷Rb2(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Rb2 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
ratEsadiolreceptor,ERELISAKit大鼠雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 克羅拉濱/氯法拉濱 Clofarabine 質(zhì)量規(guī)格:> 99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
5-羥色胺(Serotonin)轉(zhuǎn)運(yùn)功能檢測(cè)試劑盒20 克霉唑 Clotrimazole 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
MouseFreeThyroxine,FT4ELISA試劑盒小鼠游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 克霉唑(標(biāo)準(zhǔn)品) Clotrimazole 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠突觸素(SYP)ELISA試劑盒 ,英文名: SYP ELISA Kit 秋水仙堿 Colchlcine 質(zhì)量規(guī)格:> 98.5%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
兔血管生成素2(ANG-2)ELISA檢測(cè)試劑盒RabbitAngiopoietin2,ANG-2ELISAKit 96T/48T 秋水仙堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Colchlcine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
牛特異性蛋白B(PSPB)試劑盒 Bovine Pregnancy Specific Protein B,PSPB ELISA Kit 硫酸粘桿菌素,多粘菌素E硫酸鹽 Colistin Sulphate 質(zhì)量規(guī)格:≥19000IU/mg,EP6
英文名稱Humaissueinhibitorofmaixmetalloproteinase-2,TIMP-2ELISAkit人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)規(guī)格:96T/48T 硫酸粘桿菌素(標(biāo)準(zhǔn)品) Colistin Sulphate 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
動(dòng)物甲狀腺組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒10 鹽酸依氟鳥氨酸 Eflornithine HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98%,水合物
Ratprogesteronereceptor,PGRELISA試劑盒大鼠孕同受體(PGR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 色甘酸鈉 Cromolyn 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
小鼠突觸融合蛋白2(STX2)ELISA試劑盒 ,英文名: STX2 ELISA Kit 色甘酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Cromolyn 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞操作Ratnicotinamideadeninedinucleotidephosphate,NADPHELISA試劑盒大鼠煙酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人參皂苷Re(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Re 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Ratnicotinicacetylcholinereceptor,N-AChRELISAKit大鼠型乙酰膽堿受體(N-AChR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人參皂苷Re HPLC≥98% 20mg
Ratnicotinicacetylcholinereceptor,N-AChRELISA試劑盒大鼠型乙酰膽堿受體(N-AChR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人參皂苷Rd(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Rd 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Ratniicoxide,NOELISAKit大鼠(NO)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人參皂苷Rd HPLC≥98% 20mg
Ratniicoxide,NOELISA試劑盒大鼠(NO)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人參皂苷Rc(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Rc 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Ratniicoxidesyhase,NOSELISAKit大鼠合成酶(NOS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人參皂苷Rc HPLC≥98% 20mg
Ratniicoxidesyhase,NOSELISA試劑盒大鼠合成酶(NOS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人參皂苷Rb3(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Rb3 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
ratNoradrenaline,NAELISAKit大鼠去甲(NA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人參皂苷Rb2(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Rb2 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
ratNoradrenaline,NAELISA試劑盒大鼠去甲(NA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人參皂苷Rb1(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Rb1 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RatN-terminalpro-brainnaiureticpeptide,-proBNPELISAKit大鼠N端前腦素(-proBNP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人參皂苷Rb HPLC≥98% 20mg
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