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行業(yè)產(chǎn)品
當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2小鼠肺成纖維細(xì)胞操作
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
小鼠肺成纖維細(xì)胞【Mouse Lung: Normal Lung Fibroblasts】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠肺成纖維細(xì)胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-963792 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
MouseEpithelialneuophilactivatingpeptide78,ENA-78ELISA試劑盒小鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基,二甲氧基黃烷酮 HPLC≥98% 20mg
MouseErythropoietin,EPO小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基馬兜鈴酸A HPLC≥93% 10mg
MouseErythropoietin,EPOELISA試劑盒小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基千金子二萜醇 HPLC≥98% 20mg
MouseEsadiol,E2小鼠雌二醇(E2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基 HPLC≥98% 20mg
MouseEsadiol,E2ELISA試劑盒小鼠雌二醇(E2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 乙基羥基喜樹堿 HPLC≥98% 20mg
MouseEsadiolreceptor,ERELISA試劑盒小鼠雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 乙基喜樹堿 HPLC≥98% 20mg
MouseE-SelectinELISA試劑盒小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 乙氧基莫諾苷 HPLC≥98% 20mg
MouseEsiol,E3ELISA試劑盒小鼠雌三醇(E3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T O乙酰山梔苷甲酯 HPLC≥98% 20mg
Mouseesogen,EELISA試劑盒小鼠雌激素(E)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 甲氧基異歐前胡內(nèi)酯 HPLC≥98% 20mg
MouseFactorⅧ-relatedAigen,FⅧAg小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 姜酚 HPLC≥98% 20mg
英文名稱HumanActininαELISAKit人橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α(Actininα)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 螺內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Spironolactone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
動(dòng)物糖蛋白電泳遷移檢測(cè)試劑盒5 卡馬西平 Carbamazepine 質(zhì)量規(guī)格:>99,BR
Raetinol-bindingprotein,RBPELISA試劑盒大鼠視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 卡馬西平(標(biāo)準(zhǔn)品) Carbamazepine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠酶Ⅱ(CA2)ELISA試劑盒 ,英文名: CA2 ELISA Kit 卡鉑 Carboplatin 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
豚鼠白三烯B4(LTB4)ELISA檢測(cè)試劑盒guineapigLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit 96T/48T 卡鉑(標(biāo)準(zhǔn)品) Carboplatin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
牛0酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)試劑盒 Bovine pAMPK ELISA Kit 硫酸長(zhǎng)春新堿/硫酸醛基長(zhǎng)春堿 Vincristine Sulfate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
英文名稱Humanai-melanocyteELISAKit人黑色素細(xì)胞抗體(melanocyte)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 硫酸長(zhǎng)春新堿/硫酸醛基長(zhǎng)春堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Vincristine Sulfate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
動(dòng)物糖蛋白化學(xué)法*糖基分解試劑盒20 帕唑帕尼 Pazopanib 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
Raudimealbovineserumalbumincheck-upELISA試劑盒大鼠的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 非洛地平/非氯地平 Felodipine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP30,BR
小鼠酶Ⅰ(CA1)ELISA試劑盒 ,英文名: CA1 ELISA Kit 非洛地平(標(biāo)準(zhǔn)品) Felodipine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品用于含量測(cè)定
小鼠肺成纖維細(xì)胞操作SheepIerleukin1,IL-1ELISAKit綿羊白介素1(IL-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基柳杉酚 HPLC≥98% 5mg
SheepIerleukin1,IL-1ELISA試劑盒綿羊白介素1(IL-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基柳杉酚 HPLC≥95% 20mg
SheepIerleukin1β,IL-1βELISAKit綿羊白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基磷灰石 Hydroxyapatite 質(zhì)量規(guī)格:>99%,粒徑20nm
SheepIerleukin1β,IL-1βELISA試劑盒綿羊白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基利托那韋 Hydroxy Ritonavir 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
SheepIerleukin2,IL-2ELISAKit綿羊白介素2(IL-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基酪醇醋酸酯 HPLC≥98% 20mg
SheepIerleukin2,IL-2ELISA試劑盒綿羊白介素2(IL-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基酪醇;3,4-二羥基苯乙醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Hydroxytyrosol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
SheepIerleukin-2receptor,IL-2RELISAKit綿羊白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基酪醇 HPLC≥98% 20mg
SheepIerleukin-2receptor,IL-2RELISA試劑盒綿羊白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基喹硫平雜質(zhì) Quetiapine Hydroxy Impurity 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
SheepIerleukin6,IL-6ELISAKit綿羊白介素6(IL-6)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基漿果赤霉素 III HPLC≥98% 5mg
SheepIerleukin6,IL-6ELISA試劑盒綿羊白介素6(IL-6)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基甲氧基鐵屎米酮 HPLC≥98% 5mg
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