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收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
小鼠食管上皮細胞【Mouse Esophagus: Normal Esophageal Epithelial Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務(wù)標準。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠食管上皮細胞價格 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963798 |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
MouseFactorⅧ-relatedAigen,FⅧAgELISA試劑盒小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 姜烯酚 HPLC≥98% 20mg
MousefactorB,BF小鼠B因子(BF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基佛手苷內(nèi)酯 HPLC≥98% 20mg
MousefactorB,BFELISA試劑盒小鼠B因子(BF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去乙?;釣鯄A HPLC≥98% 20mg
MouseFactor-relatedApoptosis,FASELISA試劑盒小鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 香葉草氧基補骨脂素 HPLC≥98% 20mg
MouseFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISA試劑盒小鼠凝血因子Ⅸ(FⅨ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 氧黃連堿 HPLC≥98% 20mg
Mouseferritin,FEELISA試劑盒小鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T ’’’丹酚酸B單甲酯 HPLC≥98% 20mg
MouseFibrinogen,Fbg小鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T ’丹酚酸B單甲酯 HPLC≥98% 20mg
MouseFibrinogen,FbgELISA試劑盒小鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 氨基喜樹堿 HPLC≥98% 20mg
MouseFibronectin,FNELISA試劑盒小鼠纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 甲氧基喜樹堿 HPLC≥98% 20mg
MouseFMS-liketyrosinekinase3,Flt3ELISA試劑盒小鼠FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 硝基喜樹堿 HPLC≥98% 20mg
英文名稱HumanCystatinCELISAKit人胱抑素C(CysC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 萘普生(標準品) Naproxen 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
動物糖蛋白酶解法O-糖基分解試劑盒20 潑尼松 Prednisone 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP30,BR
RatSerumamyloidA,SAAELISA試劑盒大鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 潑尼松(標準品) Prednisone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
小鼠鎖鏈素(Desmosine)ELISA試劑盒 ,英文名: Desmosine ELISA Kit 強力霉素堿/強力霉素一水合物 Doxycycline monohydrate/Doxycycline base 質(zhì)量規(guī)格:>900μg/mg,USP,BR,可用于細胞培養(yǎng)
小鼠巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA檢測試劑盒Mousemacrophageinflammatoryprotein3β,MIP-3βELISAkit 96T/48T 唑來 Zoledronic acid hydrate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,一水化合物,BR
人谷胱甘肽(GSH)試劑盒 Human glathione,GSH ELISA Kit 唑來(標準品) Zoledronic acid hydrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
RatGasoiestinalcancerMarker-CA199ELISAKit大鼠胃腸癌標志物CA199ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 帕米二鈉 Pamidronate Di 質(zhì)量規(guī)格:>99%,五水合物
APC蛋白標記試劑盒1(1毫克/) 帕米二鈉(標準品) Pamidronate Di 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
MouseHelicobacterpyloriIgG,Hp-IgGELISA試劑盒小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 硫酸慶大霉素 Gentamicin sulfate 質(zhì)量規(guī)格:>590IU/MG,BR
小鼠羧肽酶N1(CPN1)ELISA試劑盒 ,英文名: CPN1 ELISA Kit 硫酸慶大霉素(標準品) Gentamicin sulfate 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
小鼠食管上皮細胞價格VTGELISAKit鯉魚卵黃蛋白原(VTG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 強力霉素??怂猁} Doxycycline Hyclate 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
VTGELISA試劑盒鯉魚卵黃蛋白原規(guī)格:96T/48T 強力霉素 HPLC≥98% 20mg
Wheatgermagglinin,WGAELISAKit麥胚凝集素/凝集蛋白(WGA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羌活醇(標準品) Notopterol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
Wheatgermagglinin,WGAELISA試劑盒麥胚凝集素/凝集蛋白(WGA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羌活醇 HPLC≥98% 20mg
α1微球蛋白(α1-MG)ELISA檢測試劑盒Monkeyα1-microglobulin,α1-MGELISAKit 96T/48T 茜素綠;酸性綠25 Alizarin green 質(zhì)量規(guī)格:BS
α-bungarotoxin,α-BGTELISAKitα-銀環(huán)蛇(α-BGT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 茜素絡(luò)合指示劑(高級,98%) Alizarin complexone 質(zhì)量規(guī)格:高級,98%
α-bungarotoxin,α-BGTELISA試劑盒α-銀環(huán)蛇(α-BGT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 茜素絡(luò)合指示劑(IND) Alizarin complexone 質(zhì)量規(guī)格:IND
白介素1(IL-1)ELISA檢測試劑盒MonkeyIerleukin1,IL-1ELISAKit 96T/48T 茜素黃R鈉鹽 Alizarin yellow R , salt 質(zhì)量規(guī)格:Ind Grade
白介素2受體(IL-2R)ELISA檢測試劑盒MonkeyIerleukin-2receptor,IL-2RELISAkit 96T/48T 茜素黃R Alizarin yellow R 質(zhì)量規(guī)格:IND
白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA檢測試劑盒MonkeyIerleukin-8,IL-8ELISAKit 96T/48T 茜素黃GG Alizarin yellow GG 質(zhì)量規(guī)格:IND
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