當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2小鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞說明
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
小鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞【Mouse Brain: Normal Cerebral Venous Vascular Smooth Muscle Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞說明 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963843 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
人結(jié)蛋白(Des)試劑盒 Human desmin ELISA Kit 酸性橙74 Acid Orange 74 質(zhì)量規(guī)格:>85%
人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)試劑盒 Human connective tissue-activating peptide Ⅲ,CTAPⅢ ELISA Kit 煌橙,藏花橙G Crocein Orange G 質(zhì)量規(guī)格:BS
人結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA檢測試劑盒HumanHaptoglobin,Hpt/HP 96T/48T 靛紅(吲哚醌) Isatin 質(zhì)量規(guī)格:AR
人結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)試劑盒 Human Hpt/HP ELISA KIT 奈比洛爾鹽酸鹽;奈必洛爾 Nebivolol 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
人結(jié)核菌桿(TB)抗體(IgA)試劑盒 Human tuberculosis(TB)aibody(IgA)ELISA kit 奈必洛爾(標(biāo)準(zhǔn)品) Nebivolol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
人結(jié)核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)試劑盒 Human tuberculosis aibody IgG,TB-Ab IgG ELISA Kit 核固紅 Nuclear fast red 質(zhì)量規(guī)格:BS
人結(jié)核菌桿抗體IgM(TB-Ab IgM)試劑盒 Human tuberculosis aibody IgM,TB-Ab IgM ELISA Kit 胭脂紅 Carmine 質(zhì)量規(guī)格:BS,用于生物學(xué)染色
人結(jié)核菌素(Tuberculin)試劑盒 Human Tuberculin ELISA Kit 酚紅 Bromophenol red 質(zhì)量規(guī)格:AR
人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CF)試劑盒 Human CF ELISA Kit 麗春紅2R(BS) Ponceau 2R 質(zhì)量規(guī)格:BS
人解脲脲原體抗體(UU-Ab)ELISA檢測試劑盒HumanUreaplasmaurealyticumaibody,UU-Ab 96T/48T 孟加拉玫瑰紅,酸性紅94 Rose bengal 質(zhì)量規(guī)格:AR
冰凍切片組織PASE-9蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 替拉替尼 17-AAG 質(zhì)量規(guī)格:HSP90 抑制劑,BR,進(jìn)分
RatCollageypeⅠ,ColⅠELISA試劑盒大鼠Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 替拉替尼 17-AAG 質(zhì)量規(guī)格:HSP90 抑制劑,BR,進(jìn)分
小鼠生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒 ,英文名: GHRP-Ghrelin ELISA Kit 鹽酸特拉唑嗪 Terazosin HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,二水合物
小鼠紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)ELISA檢測試劑盒MouseErythropoietieceptor,EPORELISAKit 96T/48T ,素 Testosterone 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
人高分子量細(xì)胞角蛋白(CK-HMW)試劑盒 Human cytokeratin High Molecular Weight,CK-HMW ELISA Kit (標(biāo)準(zhǔn)品) Testosterone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%標(biāo)準(zhǔn)品
RatHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit大鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 鹽酸丁卡因 Tetracaine HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR
BJ5183-AD-1鈣轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌100微升 鹽酸丁卡因(標(biāo)準(zhǔn)品) Tetracaine HCl 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測定
MouseIerferonβ,IFN-β/IFNBELISA試劑盒小鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 苯甲唑啉鹽酸鹽/鹽酸妥拉唑林 Tolazoline HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98%,進(jìn)口原裝
小鼠生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒 ,英文名: GHRP ELISA Kit 托特羅定 Tolterodine Tartrate 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,M受體(毒蕈堿型乙酰膽堿受體)拮抗劑
小鼠酸性成纖維細(xì)胞生長因子1(aFGF-1)ELISA檢測試劑盒Mouseacidicfibroblastgrowthfactor1,aFGF-1ELISAKit 96T/48T 托特羅定(標(biāo)準(zhǔn)品) Tolterodine Tartrate 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
小鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞說明大鼠膠原交聯(lián)(PYD)試劑盒 Rat pyridinoline,PYD ELISA Kit 萘酚AS NaphtholAS 質(zhì)量規(guī)格:0.97
大鼠膠原酶I(CollagenaseI)ELISA檢測試劑盒RatCollagenaseIELISAKit 96T/48T 萘啶酮酸;萘啶酸 Nalidixic acid 質(zhì)量規(guī)格:>98%
大鼠膠原酶II(CollagenaseII)ELISA檢測試劑盒RatCollagenaseTypeIIELISAKit 96T/48T 萘丁美酮/萘普酮(標(biāo)準(zhǔn)品) Nabumetone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA檢測試劑盒Ratglialcellline-derivedneuroophicfactor,GDNFELISAKIT 96T/48T 萘丁美酮/萘普酮 Nabumetone 質(zhì)量規(guī)格:>99%
大鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)試劑盒 Rat glial cell line-derived neuroophic factor,GDNF ELISA KIT 萘-D8(標(biāo)準(zhǔn)品) Naphthalene-d8 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠角化細(xì)胞因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)試劑盒 Rat keratinocyte aocrine factor/Amphiregulin,KAF/AR ELISA Kit 萘-1,4,5,8-四羧酸二酐(>95.0%(HPLC)(T)) Naphthalene-1,4,5,8-tetracarboxylic Dianhydride 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(HPLC)(T)
大鼠角化細(xì)胞生長因子(KGF)試劑盒 Rat Keratinocyte Growth Factor,KGF ELISA Kit 萘[2,3-a]芘(>98.0%(GC)) Naphtho[2,3-a]pyrene 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA檢測試劑盒RatCaveolin-1,Cav-1ELISAKIT 96T/48T 耐斯糖(標(biāo)準(zhǔn)品) NISTOSE 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
大鼠結(jié)蛋白(Des)ELISA檢測試劑盒RatDesmin,DesELISAKit 96T/48T 耐斯糖 HPLC≥98% 20mg
大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA檢測試劑盒RatHaptoglobin,Hpt/HPELISAKIT 96T/48T 耐爾藍(lán)A(>65%,BS) Nile blue A 質(zhì)量規(guī)格:>65%,BS
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