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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞操作
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒(méi)有透氣孔的話(huà),瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞【Rat Intestine: Normal Small Intestinal Mucosa Epithelial Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶(hù)可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿(mǎn)50ml左右*培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書(shū)及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶(hù)可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-963876 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
人神經(jīng)絲蛋白(NF)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanneurofilameprotein,NF 96T/48T XTT鈉鹽 XTT salt 質(zhì)量規(guī)格:>90%,進(jìn)分
人神經(jīng)髓鞘蛋白(p2)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanmyelinprotein2,p2 96T/48T 二氫獼猴桃內(nèi)酯,奇異果內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品) (2,6,6-Trimethyl-2-hydroxycyclohexylidene)acetic acid lactone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanneuropeptideY,NP-Y 96T/48T 二氫獼猴桃內(nèi)酯,奇異果內(nèi)酯 (2,6,6-Trimethyl-2-hydroxycyclohexylidene)acetic acid lactone 質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR
人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(-3)人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 馬西替坦;ACT064992 Macitentan 質(zhì)量規(guī)格:>99%,內(nèi)皮素(ET)受體拮抗劑
人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(-3)ELISA試劑盒人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 組蛋白去乙?;敢种苿?/span>(M 344) M344 質(zhì)量規(guī)格:>98%,HDAC抑制劑
人神經(jīng)元凋亡抑制蛋白(NAIP)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanneuronalapoptosisinhibitoryprotein,NAIP 96T/48T 2-硝基咪唑 2-Nitroimidazole 質(zhì)量規(guī)格:>98%,
人腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物(GTE-AGE)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanGlomerulaissueexact-advancedglycosylationendproducts,GTE-AGE 96T/48T 4-(三氟)-1H-咪唑 4-(Trifluoromethyl)-1H-imidazole 質(zhì)量規(guī)格:>98%
人生長(zhǎng)激素結(jié)合蛋白(P)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanGrowthHormoneBindingProtein,P 96T/48T 2--4-三氟咪唑 2-Methyl-4-trifluoromethylimidazole 質(zhì)量規(guī)格:>97%
人生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43(GAP-43)ELISA檢測(cè)試劑盒Humangrowth-associatedprotein43,GAP-43 96T/48T 2-氨基咪唑硫酸鹽 2-Aminoimidazole hemisulfate 質(zhì)量規(guī)格:>98%
人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanOrexinB,OX-B 96T/48T 奧當(dāng)卡替(MK-0822) Odanacatib;MK0822 質(zhì)量規(guī)格:>98%,cathepsin K抑制劑
動(dòng)物指(趾)甲DNA萃取試劑盒20 吡嗪-2-羧酸,吡嗪?jiǎn)昔人?/span> 2-Pyrazinecarboxylic acid 質(zhì)量規(guī)格:含量98%,化學(xué)
Ratα1-microglobulin,α1-MGELISA試劑盒大鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 達(dá)格列嗪;達(dá)格列凈 Dapagliflozin 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR,生化試劑級(jí)
小鼠染色框同源物3(CBX3)ELISA試劑盒 ,英文名: CBX3 ELISA Kit 甘草查而酮 A(標(biāo)準(zhǔn)品) Licochalcone A 質(zhì)量規(guī)格:含量≥98.0%,標(biāo)準(zhǔn)品
豬胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA檢測(cè)試劑盒Porcineinsulin-likegrowthfactorsbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKit 96T/48T 三氯卡班 Triclocarban 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%
大鼠轉(zhuǎn)移抑制基因KISS1蛋白(KISS1/Kisspeptin 1)試劑盒 Rat Kisspeptin 1,KISS1 ELISA Kit 氯法齊明(標(biāo)準(zhǔn)品) Clofazimine 質(zhì)量規(guī)格:供TCL鑒別用
英文名稱(chēng)HumanIL-1ELISAKit人白介素1(IL-1)規(guī)格:96T/48T 頭孢呋辛酯 Cefuroxime axetil 質(zhì)量規(guī)格:745~875μg/mg,USP
動(dòng)物組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒10 頭孢呋辛酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Cefuroxime axetil 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
Ratα-Glucosidase,a-GluELISA試劑盒大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 青霉素G鉀鹽 Penicillin G, potassium salt 質(zhì)量規(guī)格:>1500U/mg,USP,BR
小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)ELISA試劑盒 ,英文名: IMA ELISA Kit 青霉素G鉀(標(biāo)準(zhǔn)品) Penicillin G, potassium salt 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
小鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousethrombomodulin,TMELISAKit 96T/48T 厄多司坦 Erdosteine 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%
大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞操作大鼠水通道蛋白2(AQP-2)ELISA檢測(cè)試劑盒RatAquaporin2,AQP-2ELISAKit 96T/48T 馬來(lái)酸依那普利 Enalapril Maleate 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,USP
大鼠水通道蛋白2(AQP-2)試劑盒 Rat Aquaporin 2,AQP-2 ELISA Kit 馬來(lái)酸替加色羅(標(biāo)準(zhǔn)品) Tegaserod maleate 質(zhì)量規(guī)格:UV法含量測(cè)定
大鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISA檢測(cè)試劑盒RatAquaporin3,AQP-3ELISAKit 96T/48T 馬來(lái)酸噻嗎洛爾(標(biāo)準(zhǔn)品) Timolol Maleate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠水通道蛋白3(AQP-3)試劑盒 Rat Aquaporin 3,AQP-3 ELISA Kit 馬來(lái)酸噻嗎洛爾 Timolol Maleate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP
大鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISA檢測(cè)試劑盒RatAquaporin4,AQP-4ELISAKit 96T/48T 馬來(lái)酸曲美布?。?biāo)準(zhǔn)品) Trimebutine maleate 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
大鼠水通道蛋白4(AQP-4)試劑盒 Rat Aquaporin 4,AQP-4 ELISA Kit 馬來(lái)酸羅格列酮(標(biāo)準(zhǔn)品) Rosiglitazone Maleate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA檢測(cè)試劑盒RatAquaporin5,AQP-5ELISAKit 96T/48T 馬來(lái)酸羅格列酮 Rosiglitazone Maleate 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
大鼠水通道蛋白5(AQP-5)試劑盒 Rat Aquaporin 5,AQP-5 ELISA Kit 馬來(lái)酸桂哌齊特(標(biāo)準(zhǔn)品) Cinepazide maleate 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
大鼠水閘蛋白1(Cldn1)試劑盒 Rat Claudin-1,Cldn1 ELISA kit 馬來(lái)酸桂哌齊特 Cinepazide maleate 質(zhì)量規(guī)格:>99%
大鼠絲氨酸蛋白酶抑制劑alpha-1 試劑盒 Rat serine protease inhibitor alpha 1 ELISA kit 馬來(lái)酸氟伏沙明(標(biāo)準(zhǔn)品) Fluvoxamine maleate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
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