使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：產(chǎn)氣克雷伯氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Klebsiella aerogenes
貨號(hào)：CP914503
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。

原理:
產(chǎn)氣克雷伯氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，產(chǎn)品僅用于科研Z后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
    1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到。
    2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為。
    3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
    4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
    5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
    6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

以下是產(chǎn)氣克雷伯氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
CHAPS3-[3-(膽?；?二基]內(nèi)鹽5克AR

CFSE5(6)-羧基二醋熒光素琥珀酰亞酯10毫克生物技術(shù)級(jí)，0.625mg/ml，附滴瓶

Cetyl pyridinium HC1十六基鹽鹽100克AR

Cesium iodide化銫250克BR，97%

Cesium hydroxide monohydrate銫一水合物25克IND

Cesium chromate銫25克BR，97%

Cesium carbonate銫25克BR，97%

Cesium bromide溴化銫500克BR，95%

Cerous chloride三化鈰5克試劑級(jí)，

Cerium(IV) oxide二鈰100克AR

Cerium(III) fluoride三化鈰25克CP，40%

Cerium(III) acetate hydrate醋鈰1克CP，98.5%

Cerium carbonate hydrate鈰(Ⅲ)100克5N

Ceresin微晶蠟100克BR，85%

Cephalosporin C zinc salt7-(D-5-基-5-羧基?；?頭孢霉鹽1克超純，95%

蘆薈大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷  英文名稱：Aloe-emodin-8-O-β-D-glucopyranoside  號(hào)： 33037-46-6  規(guī)格：10mg

大黃素-1-O-葡萄糖苷  英文名稱：Emodin-1-O-glucoside  號(hào)：38840-23-2  規(guī)格：10mg

大黃酚-1-O-β-葡萄糖苷  英文名稱：Chrysophanol 1-glucoside  號(hào)：4839-60-5  規(guī)格：5mg

大黃酚-8-O-β-葡萄糖苷  英文名稱：Chrysophanol 8-O-beta-D-glucoside  號(hào)：13241-28-6  規(guī)格：10mg

遠(yuǎn)華蟾蜍精  英文名稱：ocinobufagin  號(hào)：472-26-4  規(guī)格：10mg

新對(duì)葉百部堿  英文名稱：Neotuberostemonine  號(hào)：143120-46-1  規(guī)格：20mg

偽金絲桃素  英文名稱：Pseudohypericin  號(hào)：55954-61-5  規(guī)格：10mg

香橙素  英文名稱：DIHYDROKAEMPFEROL  號(hào)：480-20-6  規(guī)格：5mg

棕櫚甲酯  英文名稱：Methyl Hexadecanoate  號(hào)：112-39-0  規(guī)格：50mg

柯因二甲醚  英文名稱：5,7-DIMETHOXYFLAVONE  號(hào)：21392-57-4  規(guī)格：20mg
產(chǎn)氣克雷伯氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒5'-HydroxyphenylCarvedilol　5'-羥基苯卡維地洛　規(guī)格：美國進(jìn)口

O-DesmehylCarvedilol　O-去甲卡維地洛　規(guī)格：美國進(jìn)口

4'-HydroxyphenylCarvedilol　4'-羥卡維地洛　規(guī)格：美國進(jìn)口

(S)-(-)-5'-BenzyloxyphenylCarvedilol　(S)-(-)-5'-芐氧基卡維地洛　規(guī)格：美國進(jìn)口

(R)-(+)-O-DesmehylCarvedilol　(R)-(+)-O-去甲卡維地洛　規(guī)格：美國進(jìn)口

(S)-(-)-O-DesmehylCarvedilol　(S)-(-)-O-去甲卡維地洛　規(guī)格：美國進(jìn)口

(R)-(+)-4'-HydroxyphenylCarvedilol　(R)-(+)-4'-羥卡維地洛　規(guī)格：美國進(jìn)口

4'-BenzyloxyCarvedilol　4'-芐氧基卡維地洛　規(guī)格：美國進(jìn)口

Carvedilol-mehyl-d3　卡維地洛-甲基-d3　規(guī)格：美國進(jìn)口

Carvedilolβ-D-Glucuronide(mixureofdiasromers)　卡維地洛β-D-葡萄糖苷酸(mixureofdiasromers)　規(guī)格：美國進(jìn)口

CecoxibCarboxylicAcid　塞來昔布羧酸　規(guī)格：美國進(jìn)口

4'-rans-HydroxyCilosazol　4'-反式-羥基西洛他唑　規(guī)格：美國進(jìn)口

3,4-DehydroCilosazol　3,4-脫氫西洛他唑　規(guī)格：美國進(jìn)口

Cilosazol-d11　西洛他唑-d11　規(guī)格：美國進(jìn)口

DidemehylchloroCialopramHydrochloride　去二甲基氯化西酞普蘭鹽酸鹽　規(guī)格：美國進(jìn)口