?儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，產(chǎn)品僅用于科研請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人皰疹病毒8型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專(zhuān)門(mén)的區(qū)域操作。

相對(duì)定量簡(jiǎn)介：
分析方法： ①雙標(biāo)曲法 ②2 － △Ct ③2 － △△Ct ④Pfaffi法
①雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法簡(jiǎn)介
公式：
優(yōu)點(diǎn)：分析簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)優(yōu)化簡(jiǎn)單
缺點(diǎn)：對(duì)每一個(gè)基因，每一輪實(shí)驗(yàn)都必需做標(biāo)準(zhǔn)曲線；必需有固定的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線；這些標(biāo)準(zhǔn)品并不代表樣品擴(kuò)增的真實(shí)狀態(tài)應(yīng)用：基因表達(dá)調(diào)控研究中與*的兩種相對(duì)定量方法之一

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
樣品要求及注意事項(xiàng)：
1、 如果提供實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)材料必須保證新鮮，請(qǐng)您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑，并用干冰運(yùn)輸。
2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ，也可以將樣品研磨后放在 Trigol中，動(dòng)植物組織 ： 50～100mg/mlTrigol，貼壁細(xì)胞：10cm2/mlTrigol，懸浮細(xì)胞：5×106動(dòng)植物，酵母細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我們要對(duì)您提供的材料進(jìn)行評(píng)估。
4、 實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴(kuò)增基因的詳細(xì)信息。

Dulcitol甜醇500毫克高純，

D-Tyrosine Methyl ester hydrochloride鹽D-酪酯5克ACS，

D-TyrosineD-β-對(duì)羥基基5克BR，99%

dTTP,4Na2′-脫氧胸苷-5′-三磷四鹽1克高純，

DTT1,4-二蘇糖醇250UCP，

D-TrytophanD-胰化蛋白基5克BR，99%

D-TryptophanolD-色醇1克BR，97%

D-Tryptophan methyl ester hydrochlorideD-色酯鹽鹽5克BR，

D-TheronineD-α-基-β-羥基5克BR，99%

DTE二代赤蘚糖醇1KU試劑級(jí)，

dTDP2′-脫氧胸苷-5′-二磷三鹽100毫克BR，90%

D-Tartaric acid右旋酒石25克AR，99.5%

DTAC月桂基三基化銨25克高純，60%

DTAB溴代十二基三銨100克IND

D-SorbitolD-山梨糖醇10毫克高純，

野馬追內(nèi)酯K  英文名稱(chēng)：Eupalinolide K  號(hào)：108657-10-9  規(guī)格：5mg

鳳仙萜四醇苷F  英文名稱(chēng)：Hosenkoside F  號(hào)：160896-45-7  規(guī)格：5mg

鳳仙萜四醇苷G  英文名稱(chēng)：Hosenkoside G  號(hào)：160896-46-8  規(guī)格：5mg

鳳仙萜四醇苷K  英文名稱(chēng)： Hosenkoside K  號(hào)：160896-49-1  規(guī)格：10mg

鳳仙萜四醇苷M  英文名稱(chēng)： Hosenkoside M  號(hào)：161016-51-9  規(guī)格：5mg

五味子 97%  英文名稱(chēng)：Schisandrone  號(hào)：98619-25-1  規(guī)格：5mg

野馬追內(nèi)酯B  英文名稱(chēng)：Eupalinolide B  號(hào)：877822-41-8  規(guī)格：20mg

戈米辛H  英文名稱(chēng)：Gomisin H  號(hào)：66056-20-0  規(guī)格：5mg

愈創(chuàng)木素  英文名稱(chēng)：Guaiacin  號(hào)：36531-08-5  規(guī)格：5mg

赤式-2-(4-烯丙基-2,6-二甲氧基氧基)-1-(4-羥基-3-甲氧基基)-丙烷-1-醇  英文名稱(chēng)： 1-(3,4-dimethoxyphenyl)-2-(4-allly-2,6-dimethoxyphenoxy)propan-1-ol  號(hào)：41535-95-9  規(guī)格：5mg
人皰疹病毒8型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒ribuylsulfoniumIodide　三丁基碘化锍(>96.0%())　規(guī)格：含量測(cè)定

1,3,3-rimehylindolinobenzopyrylospiran[PhoochromicCompound]　螺[1,3,3-*基吲哚苯并二氫吡喃][光致變色化合物](>98.0%(HPLC)())　規(guī)格：含量測(cè)定

1,3,3-rimehylindolinonaphhospirooxazine[PhoochromicCompound]　1,3,3-*基吲哚-奈諤嗪(>98.0%(HPLC)())　規(guī)格：含量測(cè)定

3,3-Diphenyl-3H-naphho[2,1-b]pyran　3,3-二-3H-萘并[2,1-b]吡喃(>98.0%(HPLC))　規(guī)格：含量測(cè)定

hioindigo　硫靛紅　規(guī)格：含量測(cè)定

CholesrolLinolea　亞油酸膽固醇酯(>95.0%())　規(guī)格：含量測(cè)定

CholesrolPalmia　棕櫚酸膽固醇酯(>97.0%())　規(guī)格：含量測(cè)定

Cholesrol n-Ocanoa　正辛酸膽固醇酯(>95.0%(GC))　規(guī)格：含量測(cè)定

CholesrolOlea　油酸膽固醇酯(>85.0%(GC))　規(guī)格：含量測(cè)定

CholesrylChloridefromBeefFa　氯化膽固醇(來(lái)自牛脂)(>87.0%(GC))　規(guī)格：含量測(cè)定

Cholesrolrans-Cinnama　反-肉桂酸膽固醇酯(>96.0%(HPLC)())　規(guī)格：含量測(cè)定

CholesrolDecanoa　癸酸膽固醇酯　規(guī)格：含量測(cè)定

CholesrolHydrocinnama　氫化肉桂酸膽固醇酯(>95.0%(GC))　規(guī)格：含量測(cè)定

CholesrolLaura　月桂酸膽固醇酯(>95.0%(GC))　規(guī)格：含量測(cè)定

CholesrolMyrisa　豆蔻酸膽固醇酯(>98.0%())　規(guī)格：含量測(cè)定