使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：副雞嗜血桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Haemophilus paragallinarum
貨號：CP914416
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

原理:
副雞嗜血桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒所謂實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，產(chǎn)品僅用于科研Z后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
特點(diǎn)優(yōu)勢：
    1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到。
    2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為。
    3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
    4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
    5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
    6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

以下是副雞嗜血桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
Methyl 4-hydroxybenzoate尼泊金酯25克GR，99.5%

Methyl 4-aminobenzoate4-基酯25克BR，

Methyl 4-(aminomethyl)benzoate hydrochloride4-(基基)酯鹽鹽25克BR，1M四溶液

meso-2,3-Dibromosuccinic2,3-二溴二0.5毫升BR

Mesityl oxide基異100毫升BR，

MES sodium salt鹽500克BR

MES500克IND

Merrifield resin基樹脂10克BR

Mepiquat chloride助壯素1克高純，99%

Menthone1-基-4-異基環(huán)已-[3]25克BR

Menthol（-）-薄荷醇25克CP，70%

MEMO3-(異酰氧)基三氧基硅1公斤高純，99%

MelibioseD(+)-密二糖一水1毫克高純，

MEHQ對羥基醚5克特純，99%

Meglumine葡5毫克高純，

20(R)-人參皂苷RH2  英文名稱：20(R)-Ginsenoside Rh2  號： 112246-15-8  規(guī)格：20mg

原人參二醇  英文名稱：Protopanaxdiol  號：30636-90-9  規(guī)格：20mg

原人參三醇  英文名稱：Protopanaxatriol  號：34080-08-5  規(guī)格：20mg

25-甲氧基-原人參三醇  英文名稱：25-OCH3-Protopanaxtiol  號：  規(guī)格：10mg

肉豆蔻木脂素  英文名稱：Myrislignan  號：171485-39-5  規(guī)格：20mg

肉豆蔻  英文名稱：Myristic acid  號：544-63-8  規(guī)格：20mg

染料木素  英文名稱：Genistein  號：446-72-0  規(guī)格：20mg

染料木苷  英文名稱：Genistin  號：529-59-9  規(guī)格：20mg

升麻素苷  英文名稱：Prim-O-glucosylcimifugin  號：80681-45-4  規(guī)格：20mg

升麻素  英文名稱：Cimifugin  號：37921-38-3  規(guī)格：20mg
副雞嗜血桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒Alkene　鹽酸地芬尼多雜質(zhì)（烯化合物)（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：純度大于97%含量84.0-102%,USP30

N-Mehylparoxeine　N-甲基帕羅西汀（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：純度大于98%

Sevoflurane　七氟烷（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：純度大于98%

Diaveridine　二甲氧芐啶（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：純度大于98%,BR

Mesanolone　美雄諾龍（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：純度大于98%,BR，一水物

SodiumAminosalicylaDihydra　對氨基水楊酸鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：純度大于98%,USPgrade

MehylhioniniumChloriderihydra　亞甲藍(lán)（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：純度大于98.5%,BR

WarfarinSodium　華法林鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：純度大于99%,R構(gòu)型

WarfarinSodium　華法林鈉　規(guī)格：催化劑載體,8-16目

Lomusine　洛莫司汀（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：大于98%，化學(xué)純

FluphenazineDecanoa　癸氟奮乃靜（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：單酯含量大于40%

DobuamineHydrochloride　鹽酸多巴酚丁胺（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：蛋白含量≥90%,BR

5,5-Diphenylhydanoin　苯妥英（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：滴定法≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

Adamanane　金剛烷（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：滴定法≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品

PropafenoneHydrochloride　鹽酸普羅帕酮（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：電鍍脫色,200目,fromwood