PCR實驗步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應，使目的DNA得以迅速擴增。
其主要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側的兩條單鏈互補結合，兩個引物在模板上結合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。

具有下列特點：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強。預期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結果。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。
反應五要素：
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。

熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

酸性藍29(>50%，Ind Grade)質(zhì)量規(guī)格：>50%，Ind GradeAcid blue 29  英文名稱MouseT3ELISAKit小鼠狀腺原氨酸(T3)規(guī)格：96T/48T  大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

7-(二氨基)-4-三氟(>97.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)7-(Dimethylamino)-4-(trifluoromethyl)coumarin  TOP10細菌1毫升  人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)試劑盒 Human VEGFR-2/Flk-1 ELISA kit

7-(二乙基氨基)-3-羧酸(>98.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)7-(Diethylamino)coumarin-3-carboxylic Acid  rabbitmaixmetalloproteinase9,MMP-9ELISA試劑盒兔子基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒 ，英文名： ssDNA ELISA Kit

6-[4-(二苯基氨基)苯基]-3-羧酸乙酯(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)Ethyl 6-[4-(Diphenylamino)phenyl]coumarin-3-carboxylate  小鼠白介素25(IL25)ELISA試劑盒 ，英文名： IL25 ELISA Kit  RatIerleukin4,IL-4ELISA試劑盒大鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
一葉秋堿 ，一葉萩堿Securinine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，對照品  小鼠原鈣黏素15(PCDH15)ELISA試劑盒 ，英文名： PCDH15 ELISA Kit  ELISAKitGH豬生長激素規(guī)格：48T/96T

巖藻糖；L-巖藻糖L-(-)-Fucose 質(zhì)量規(guī)格：≥99%,BR  猴載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA檢測試劑盒MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 96T/48T  humaneosinophil-associatedribonucleaseAfamilymember2ELISAKit人嗜酸性白血球相關之RNA水解酵素家族成員2(EAR2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

果膠酶Pectinase質(zhì)量規(guī)格：3萬U/g  犬基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)試劑盒 Canine Maix metalloproteinase 13,MMP-13 ELISA kit  人特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

β-淀粉酶(70萬u/ml液體)beta-Amylase質(zhì)量規(guī)格：BR,70萬u/ml液體  英文名稱HumanAngiotensinIconveingenzymeELISAKit人血管緊張素I轉化酶(ACE)規(guī)格：96T/48T  小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)試劑盒 Mouse oxidized lowdensity lipoprotein,OxLDL ELISA Kit
大豆擬莖點種腐病菌PCR試劑盒電泳級SYBR Green I 10000X

DNA稀釋液

NP40 Lysis Buffer