當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞染色>> 改良Lillie-Mayer*100ml使用說明書
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更新時間:2017-07-06 09:09:53瀏覽次數(shù):164次
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改良Lillie-Mayer*100ml使用說明書使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測時,細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
改良Lillie-Mayer*100ml使用說明書操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請在1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
改良Lillie-Mayer*100ml使用說明書實驗步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
HCT 116(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4B
ACVR1 Others Canine 狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
LS174T細(xì)胞,人結(jié)腸癌細(xì)胞 人黑色素瘤細(xì)胞,SK37細(xì)胞 人成骨肉瘤細(xì)胞;Saos-2
人永生化表皮細(xì)胞;HaCaT
APOA1 Others Human 人 ApoAI 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
CL-0111HL-7702(人肝正常細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
IgG2b Others Mouse 小鼠 IgG2b-Fc 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
小鼠胃粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
OP9小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞 OP9 mouse bone marrow stromal cells a-MEM培養(yǎng)基+20%FBS
LIF Protein Mouse 重組小鼠 LIF 蛋白 (His 標(biāo)簽)
RT4(人膀胱移行細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 T-24(膀胱變移細(xì)胞癌)
DAPK1 Others Human 人 DAPK1 / DAP Kinase 1 (aa 1-363) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人表皮黑色素細(xì)胞-HEM-a
兔角膜后基質(zhì)層成纖維細(xì)胞;RCBBF
Y1細(xì)胞,腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞 人胰腺癌細(xì)胞,MIApaca-2細(xì)胞 CM-M008小鼠支氣管成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠骨肉瘤細(xì)胞;UMR-106
CDH4 Others Human 人 R-Cadherin / CDH4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)免疫試劑盒 Human VEGFR-2/Flk-1 ELISA kit
人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒 ,英文名: ssDNA ELISA Kit
RatInterleukin4,IL-4ELISA試劑盒大鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanGlutathioneperoxidase,GSH-PxELISA試劑盒人*過氧化酶(GSH-Px)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanIschemiaModifiedAlbumin,IMAELISAKit人缺血修飾白蛋白(IMA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠凋亡信號調(diào)節(jié)激酶I(ASK-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human myelin basic protein (MBP) ELISA Kit 人髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒
HumancoagulationfactorⅫ,FⅫELISAKit 人*Ⅻ(FⅫ)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
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