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福爾根染色液(Feulgen Stain)3x50ml實(shí)驗(yàn)方法

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更新時(shí)間:2017-07-07 11:48:15瀏覽次數(shù):689次

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福爾根染色液(Feulgen Stain3x50ml實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
27-AAD避光保存及使用。
37-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測(cè)組織樣本。
福爾根染色液(Feulgen Stain3x50ml實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)515min;
3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō),也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng),用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對(duì)照組;
2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
5)避光、室溫反應(yīng)5 min
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm,發(fā)射波長(zhǎng)647 nm,7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
福爾根染色液(Feulgen Stain3x50ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細(xì)胞;
3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS4)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細(xì)胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
5Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
6PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μLPI染色。
7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL1×Binding Buffer。
SMC-1(人胸膜瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHCPEC tRNA

PDGFRB Others Rat 大鼠 PDGFRB / PDGFR-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

MDA-MB-453細(xì)胞,人導(dǎo)管癌細(xì)胞 鼠細(xì)胞系,B82細(xì)胞 膀胱平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

CL-0305SF-295(XG惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

HPAEC Pellet 人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 心肌細(xì)胞生長(zhǎng)添加物CMGS
人心肌成纖維細(xì)胞-心房RNAHCF-aa miRNA5 μg

GOLM1 Others Human GOLM1 / GP73 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

P3X63Ag8 小鼠骨髓瘤細(xì)胞

小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(EGFP標(biāo)記)

小鼠皮層神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(EGFP標(biāo)記)

人胚胎肺成纖維細(xì)胞;WI-38 人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
CLEC4D Others Rat 大鼠 CLEC4D / CLECSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞cDNAHLEC cDNA

雜交瘤(B類(lèi));Z1510A2G6A2F8

Bel-7404細(xì)胞,人肝癌細(xì)胞 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;CHO

L1210(小鼠白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

Promocell C-28012 Mesenchymal Stem CellChondrogenic Different. Medium, 間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨分化培養(yǎng)基(即用型) 100ml
大鼠溴脫氧核苷*(BrdU)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)免疫試劑盒 Human ICAM-1 ELISA Kit

半胱酸(Cys)含量測(cè)試盒 可見(jiàn)分光光度法 50/48

Ratoxidizedlowdensitylipoprotein,OxLDLELISA試劑盒大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanICEprotease-activatingfactor,IRAPELISA試劑盒人ICE蛋白酶激活因子(IRAP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanMatrixmetalloproteinase1,MMP-1ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD glucosidase)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human gastric inhibitory polypeptide (GIP) ELISA Kit 人胃抑素(GIP)ELISA試劑盒

Humancomplexedprostatespecificantigen,cPSAELISAKit 人復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanC-ReactiveProtein,CRPELISA試劑盒人C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織CSK激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20

HumanProtamine1,PRM1ELISAKit人*1(PRM1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
福爾根染色液(Feulgen Stain3x50ml實(shí)驗(yàn)方法人抗鹽抵抗的酸性磷酸酶(TRAP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人抗酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人抗抗體(AsAb)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人抗結(jié)核桿菌(TB-AbELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

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