堿性固綠染色試劑盒100ml實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
堿性固綠染色試劑盒100ml實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
堿性固綠染色試劑盒100ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
HELF(人胚肺成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

人心肝成纖維細(xì)胞RNAHCF miRNA5 μg

SELPLG Others Human 人 PSGL-1 / CD162 / SELPLG 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

EJ細(xì)胞，人膀胱癌細(xì)胞 小鼠成纖維細(xì)胞系,McCoy細(xì)胞 人少突膠質(zhì)細(xì)胞

人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

hMSC-BM-c 人類骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(hMSC-BM) 500,000cells 小鼠腦膜細(xì)胞MMenC
牛腎細(xì)胞;MDBK

GUCA1A Others Human 人 GCAP1 / GUCA1A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

腎系膜細(xì)胞Many types of cells包裝：5 ×105次方(1ml)

團(tuán)頭魴尾鰭細(xì)胞;WCF 人卵巢畸胎瘤細(xì)胞，PA-1細(xì)胞 SK-OV-3(卵巢癌細(xì)胞)

人皮膚黑色素瘤細(xì)胞;SK-MEL-1

EFNA3 Others Human 人 EphrinA3 / EFNA3 / EFL2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
FAM3C Others Human 人 FAM3C / ILEI 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HCT-8 [HRT-18]

CM-R018大鼠頜下腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

HGC-27細(xì)胞，人未分化胃癌細(xì)胞 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞,BE(2)-M17細(xì)胞 恒河猴腎細(xì)胞;RM-1

CT26.WT(小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

CA10 Others Human 人 CA10 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子D(VEGF-D)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人細(xì)胞色素c氧化酶亞基5B,線粒體(COX5B)免疫試劑盒 Human Cytochrome c oxidase subunit 5B,mitochondrial(COX5B)ELISA kit

AMP含量測(cè)試盒 高效液相色譜法 50管/48樣

Ratnuclearfactor-κBp65,NF-κBp65ELISA試劑盒大鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Humanhumanlysosomal-associatedmembraneprotein2,HLAMP-2ELISA試劑盒人溶酶體相關(guān)膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanmajorhistocompatibilitycomplexⅢ,MHCⅢ/HLA-ⅢELISAKit人主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠6酮前列腺素(6-K-PG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat cytochrome P450 (CYP450) ELISA Kit 大鼠細(xì)胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒

Human8-isoprostaglandin,8-iso-PGELISAKit 人8異前列腺素(8-iso-PG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanComplementfragment3b,C3bELISA試劑盒人補(bǔ)體片斷3b(C3b)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織EINKINASE1δ激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

Humanprotocadherin1,PCDH1ELISAKit人原鈣黏素1(PCDH1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
堿性固綠染色試劑盒100ml實(shí)驗(yàn)方法人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)Elisa試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人可溶性凋亡相關(guān)因子配體(sFASL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝