細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

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產(chǎn)品描述：提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對細(xì)胞因子有依賴性的細(xì)胞株時還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長特性，在適當(dāng)?shù)臅r候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細(xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

實驗操作步驟： 
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動物。   
b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；

營養(yǎng)瓊脂NA二基亞砜 GCS, ≥99.95% (GC)去氧膽酸鹽枸櫞酸鹽乳糖蔗糖瓊脂pUNO1-hAOAH

營養(yǎng)瓊脂平板NA二基亞砜  AR,>99%(GC)Honda氏產(chǎn)毒肉湯pUNO1-hAPEX1a-D148

營養(yǎng)肉湯二基亞砜 for HPLC, ≥99.7%革蘭氏染色液pUNO1-hAPEX1a-E148

無菌 0.5%TTC 溶液二基亞砜  >99.8%(GC)大腸桿菌顯色培養(yǎng)基pUNO1-hAPR

營養(yǎng)瓊脂二基亞砜 電子級大腸菌群顯色培養(yǎng)基pUNO1-hAPRILa

多粘菌素 B 溶液二基亞砜 無水溶劑級 阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基（DFI瓊脂）pUNO1-hARF6

山梨醇發(fā)酵管pH8.0二基亞砜 分子生物學(xué),≥99.9%VRBG瓊脂pUNO1-hARHGEF2a

緩沖蛋白胨水BPW二基亞砜 多肽合成腸道菌增菌肉湯（EE）pUNO1-hARNT

無菌緩沖蛋白胨水BPW二基亞砜 藥用級西蒙氏枸櫞酸鹽培養(yǎng)基pUNO1-hARSA

鹽胱氨酸SC增菌液二基亞砜 ACS，光譜級阪崎腸桿菌成套生化鑒定管pUNO1-hASCa

大鼠成骨細(xì)胞價格水中醛標(biāo)準(zhǔn)溶液100mg/L百得OEM的genex移液器魚膠原蛋白肽Mouse NRIP1(Nuclear Receptor Interacting Protein 1) ELISA Kit

Mouse NSE(Neuron-Specific Enolase) ELISA Kit

水中氨標(biāo)準(zhǔn)溶液 500mg/L百得OEM的genex移液器梔子提取物（梔子苷）Mouse NT-4(Neurotrophin 4) ELISA Kit

Mouse NT-proBNP(N-terminal pro-Brain Natriuretic Peptide) ELISA Kit

醇中正己烷標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml百得OEM的genex移液器軟冰淇淋粉Mouse NTRK2(Neurotrophic Tyrosine Kinase Receptor Type 2) ELISA Kit

Mouse NTXI(Cross Linked N-opeptide of Type I Collagen) ELISA Kit

酸正酯標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml,溶劑:醇百得OEM的genex移液器蜂膠粉Mouse NUP160(Nucleoporin 160kDa) ELISA Kit

Mouse OC/BGP(Osteocalcin) ELISA Kit

醇中正十一烷標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml大龍手動大容量移液器（助理移液器）雙(三羥基)烷Mouse OCT(Ornithine Carbamoyl Transferase) ELISA Kit

Mouse OFQ/N(Orphanin FQ/Nociceptin) ELISA Kit

醇中正十六烷標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlLevo Plus大容量電動移液器還原型谷胱甘肽鈉Mouse OLFM4(Olfactomedin 4) ELISA Kit

Mouse OVA sIgE(Ovalbumin Specific IgE) ELISA Kit

水質(zhì) 陰離子表面活性劑0.361-0.707mg/L,分析標(biāo)準(zhǔn)品酶標(biāo)板（不可拆）  96孔板，透明，平底，高結(jié)合表面，未滅菌，酶標(biāo)板，袋裝，25個/包，4包/箱二烯基三硫醚Mouse OVA sIgG(Ovalbumin Specific IgG) ELISA Kit

Mouse OXA(Orexin A) ELISA Kit

濃度范圍:0.812-3.30(mg/L)，分析標(biāo)準(zhǔn)品3M酸鈉 PH5.2棉籽油酸Mouse PACAP(Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide) ELISA Kit

Mouse PACAP-38(Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide 38) ELISA Kit

一溴二氯烷標(biāo)準(zhǔn)溶液455ug/ml,溶劑:醇3M酸鈉 PH5.2羥基地奧司明Mouse PAF(Plaet Activating Factor) ELISA Kit

Mouse PAI-1(Plasminogen Activator Inhibitor 1) ELISA Kit

γ-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,溶劑：醇5M 溶液(高壓滅菌) 500ml11a-羥基坎利酮Mouse PAI-2(Plasminogen Activator Inhibitor 2) ELISA Kit

Mouse PAP(Plasmin-Antiplasmin Complex) ELISA Kit