Annexin V-FITC/PI 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
產(chǎn)品名稱：Annexin V-FITC/PI 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法
儲(chǔ)存條件：2-8℃避光保存。*保存于-20℃避光。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡介：

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。在正常細(xì)胞中，磷脂酰*（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰*（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細(xì)胞可以識(shí)別翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面的PS從而將這些程序性死亡的細(xì)胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細(xì)胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS高親和力特異性結(jié)合。PS外翻發(fā)生在細(xì)胞核破裂，DNA化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得AnnexinV與PS的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測(cè)標(biāo)志事件。

Annexin V-FITC/PI 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
Annexin V-FITC/PI 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
柑橘屬 Citrus nobilis Lour. Nobiletin 川陳皮素 478-01-3 C21H22O8 ≥98%

知母皂苷A-ⅢTimoscponinc-III41029-79-420mg

景洪暗羅'Polyalthia cheliensis 6α,16,18-Trixy7noxycleroda -3,13-dien-15,16-olide 6ALPHA,16,18-三輕基克羅-3,13-二烯-15,16-內(nèi)酯 1017233-48-5 C20H30O5 醋酸潑泥松龍(100124

含量測(cè)定聯(lián)本芐唑100326-200201常溫，避光50mg

*相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品42017-89-0 25mg
100986-89-8 左氧扶沙星相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 35mg

畢靈減Bicuculline482-49-420mg

Ferulic acid 反式阿魏酸 537-98-4

鹽酸*標(biāo)準(zhǔn)品5411-22-3200mg鹽酸*標(biāo)準(zhǔn)品

絞股藍(lán)皂苷XLIX;Gypenoside 94987-08-3 20mg 訂購|咨詢
土荊皮乙酸 Pseudolaric Acid B 分 子 量：432.4600 編號(hào)：82508-31-4 分子式：C23H28O8 別　　名：土槿皮乙酸;土荊乙酸 【基本用途】本品用于含量測(cè)定。

紫蘇Perilla frutescens (Linn.) Britt. Perillyl Alcohol 紫蘇醇 536-59-4 C10H16O 稀土球墨鑄鐵成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(G01119a

供含量測(cè)定用喬松素111829-201001常溫，避光20mg

Mebendazole 達(dá)唑標(biāo)準(zhǔn)品31431-39-7 200mg

升麻 Cimicifuga foetida L. Isoferulic acid 異阿魏酸 537-73-5 C10H10O4 ≥98%
15-OxoEDE （25 ug）     15-oxo-11Z，13E-eicosadienoic acid； 15-KEDE； 15-OxoEDE

α-（difluorometxyl）-DL-Arginine （5 mg）     DFMA|RMI 71897； 2-（difluorometxyl）arginine

Nuclear Red DCS1     Nuclear Red DCS1

Lignoceroyl Ethanolamide （10 mg）     N-（2-xy7noxyetxyl）-tetracos*； Lignoceroyl Ethanolamide

5（Z），8（Z），11（Z）-Eicosatrienoic Acid Ethanolamide （500 ug）     N-（2-xy7noxyetxyl）-5Z，8Z，11Z-eicosatrienamide； Mead Acid Ethanolamide； 5（Z），8（Z），11（Z）-Eicosatrienoic Acid Ethanolamide

Dietxylenetriamine NONOate； DETA NONOate； （Z）-     NOC-18
gp120, HIV-1 MNTyr-Asn-Ala-Lys-Arg-Lys-Arg-Ile-His-Ile-Gln-Arg-Gly-Pro-Gly-Arg-Ala-Phe-Tyr-Thr-Thr-Lys-Asn-Ile-Ile

α-EndorphinTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr

[Nle13, Glu14] Motilin, human, porcinePhe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Nle-Glu-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly-Gln

Biotin-Neurokinin BBiotin-Asp-Met-His-Asp-Phe-Phe-Val-Gly-Leu-Met-NH2

P60c-src Substrate IIAc-Ile-Tyr-Gly-Glu-Phe-NH2
Annexin V-FITC/PI 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法3,3,5-*基環(huán)己酮3,3,5-Trimetxylcyclohexanone

21888-25MG羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯 CFSE150347-59-425MG0

A0175-50GAlbumin Bovine,Fraction V,Salt-free form pH 5.1 牛血清白蛋白(低鹽)9048-46-850g

100bp Ladder250ul

Lecithin,from egg yolk5g