收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒(méi)有透氣孔的話(huà),瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
小鼠食管平滑肌細(xì)胞【Mouse Esophageal: Normal Esophageal Smooth Muscle Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶(hù)可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿(mǎn)50ml左右*培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書(shū)及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶(hù)可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 小鼠食管平滑肌細(xì)胞直銷(xiāo) |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-963801 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
英文名稱(chēng)RatAquaporin4大鼠水通道蛋白4(AQP4)規(guī)格:96T/48T (R)-?;疗丈?/span>-β-D-葡萄糖苷酸 (R)-Naproxen Acyl-β-D-glucuronide 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱(chēng)RatAquaporin4大鼠水通道蛋白4(AQP4)規(guī)格:96T/48T (1RS)-1-(6-甲氧-2-萘基)乙醇(萘普生雜質(zhì)K) (1RS)-1-(6-Methoxy-2-naphthyl)ethanol (Naproxen Impurity K) 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱(chēng)RatAquaporin5大鼠水通道蛋白5(AQP5)規(guī)格:96T/48T 6'-甲氧基-2'-萘乙酮 (萘普生雜質(zhì) L) 6'-Methoxy-2'-acetonaphthone (Naproxen Impurity L) 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱(chēng)RatAquaporin5大鼠水通道蛋白5(AQP5)規(guī)格:96T/48T 強(qiáng)力霉素鹽酸鹽 Doxycycline 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱(chēng)Ratargininevasopressin大鼠精氨酸加壓素規(guī)格:96T/48T 強(qiáng)力霉素磺基水楊酸 Doxycycline ssa 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱(chēng)RatATH大鼠促腎上腺激素皮質(zhì)激素(RatATH)規(guī)格:96T/48T 強(qiáng)力霉素??怂猁} Doxycycline Hyclate 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱(chēng)RatATH大鼠促腎上腺激素皮質(zhì)激素(RatATH)規(guī)格:96T/48T 帕米二鈉鹽 Pamidronate, Di Salt 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱(chēng)RatAT-III大鼠抗凝血酶(AT-III)規(guī)格:96T/48T 頭孢呋辛 Cefuroxime 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱(chēng)RatAT-III大鼠抗凝血酶(AT-III)規(guī)格:96T/48T 頭孢他啶-d5 Ceftazidime-d5 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
英文名稱(chēng)RatAZT大鼠疊氮胸苷(AZT)規(guī)格:96T/48T Δ2-頭孢他啶 Δ2-Ceftazidime 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
RatGATAbindingprotein4,GATA4ELISAKit大鼠GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 鹽酸克林霉素 Clindamycin HCl 質(zhì)量規(guī)格:>800μg/mg,USP,BR
APC蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25 鹽酸克林霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) Clindamycin HCl 質(zhì)量規(guī)格:>800μg/mg,含量測(cè)定
Mousehemeoxygenase1,HO-1ELISA試劑盒小鼠血紅素氧合酶1(HO-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 鹽酸維拉帕米 Verapamil HCl 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
小鼠髓樣細(xì)胞觸發(fā)性受體2(EM2)ELISA試劑盒 ,英文名: EM2 ELISA Kit 鹽酸維拉帕米(標(biāo)準(zhǔn)品) Verapamil HCl 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousemaixmetalloproteinase3,MMP-3ELISAkit 96T/48T 霉酚酸; 麥考酚酸;MPA Mycophenolic acid 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
人谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶2抗體(IgG)試劑盒 Human ansglaminase 2 aibody IgG ELISA kit 霉酚酸; 麥考酚酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Mycophenolic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品
RatGelsolinELISAKit大鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 阿莫西林/羥氨芐青霉素 Amoxicillin 質(zhì)量規(guī)格:BR級(jí),可用于細(xì)胞培養(yǎng),度99%以上,三水合物,USP30
APC蛋白共沉淀分析試劑盒5 阿莫西林(標(biāo)準(zhǔn)品) Amoxicillin 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
Mousehemeoxygenase2,HO-2ELISA試劑盒小鼠血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 非諾貝特 Fenofibrate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,EP6.0
小鼠髓樣前體細(xì)胞抑制因子2(MPIF2)ELISA試劑盒 ,英文名: MPIF2 ELISA Kit 非諾貝特(標(biāo)準(zhǔn)品) Fenofibrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠食管平滑肌細(xì)胞直銷(xiāo)冰凍切片組織PASE-3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 千金子二萜醇二乙酰苯甲酰酯(標(biāo)準(zhǔn)品) 5,15-Diacetyl-3-benzoyllathyrol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
冰凍切片組織PASE-4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 千金子二萜醇二乙酰苯甲酰酯 HPLC≥98% 20mg
冰凍切片組織PASE-5蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 千金子二萜醇 HPLC≥98% 20mg
冰凍切片組織PASE-6蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 千金藤素(標(biāo)準(zhǔn)品) Cepharanthine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
冰凍切片組織PASE-7蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 千金藤素 HPLC≥98% 20mg
冰凍切片組織PASE-8蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 千金藤素 Cepharanthine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC ≥98%,BR
冰凍切片組織PASE-9蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 千金藤堿 HPLC≥98% 5mg
冰凍切片組織CDK2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 千層紙素AβD葡萄糖醛酸苷甲酯 HPLC≥95% 20mg
冰凍切片組織CDK3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 千層紙素AβD葡萄糖醛酸苷 HPLC≥98% 5mg
冰凍切片組織CDK4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 千層紙素AβD葡萄糖醛酸苷 HPLC≥94% 5mg