收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
小鼠胰島細胞【Mouse Islet :Islet Cells 】產(chǎn)品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務(wù)標準。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠胰島細胞說明 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963831 |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
人基膜聚糖/內(nèi)腔蛋白(LUM)試劑盒 Human lumican,LUM ELISA Kit 甜菜堿(標準品) Betaine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
人基質(zhì)γ羧基谷氨酸蛋白(MGP)ELISA檢測試劑盒HumanMaixGlaProtein,MGP 96T/48T 甜菜堿 Betaine 質(zhì)量規(guī)格:>99%,無水高
人基質(zhì)γ羧基谷氨酸蛋白(MGP)試劑盒 Human MGP ELISA Kit 尿酸 Uric acid 質(zhì)量規(guī)格:0.99
人基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)試劑盒 Human Maix metalloproteinase 1,MMP-1 ELISA kit 尿酸(標準品) Uric acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標準品
人基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)試劑盒 Human Maix metalloproteinase 10,MMP-10 ELISA kit 度米芬 Domiphen bromide 質(zhì)量規(guī)格:>98%,AR
人基質(zhì)金屬蛋白酶12(MMP-12)試劑盒 Human Maix Metalloproteinase 12,MMP-12 ELISA Kit 甜菜堿,一水 Betaine monohydrate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)試劑盒 Human Maix metalloproteinase 13,MMP-13 ELISA kit 萘酚AS-D-乙酸酯 Naphthol AS-D acetate 質(zhì)量規(guī)格:0.98
人基質(zhì)金屬蛋白酶14(MMP-14)試劑盒 Human Maix Metalloproteinase 14,MMP-14 ELISA Kit 鋅原卟啉 Zinc protoporphyrin 質(zhì)量規(guī)格:進分
人基質(zhì)金屬蛋白酶1酶原(Pro-MMP-1)試劑盒 Human Pro-Maix Metalloproteinase 1,Pro-MMP-1 ELISA Kit 美伐他汀,康百汀 Mevastatin 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR,可用于細胞培養(yǎng)
人基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)試劑盒 Human Maix metalloproteinase 2/Gelatinase A,MMP-2 ELISA kit 美伐他汀(標準品) Mevastatin 質(zhì)量規(guī)格:>95%,標準品,用于含量測定
棗椰樹(datepalm)培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑 非布索坦 Febuxostat 質(zhì)量規(guī)格:≥99%
MouseDehydroepiandrosterone,DHEAELISAKit小鼠脫氫表雄同(DHEA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 非布索坦(標準品) Febuxostat 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
小鼠雙氫(DHT)ELISA試劑盒 ,英文名: DHT ELISA Kit 非那西丁 Phenacetin 質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR
小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA檢測試劑盒MouseVascularEndothelialcellGrowthFactor,VEGFELISAKIT 96T/48T 非那西丁(標準品) Phenacetin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
人高香草酸(HVA)試劑盒 Human Homovanillic acid,HVA ELISA Kit 鹽酸芬戈莫德 Fingolimod HCL /FTY-720 質(zhì)量規(guī)格:≥99.0%,BR,可用于細胞培養(yǎng)
RatgranzymesB,Gzms-BELISAKit大鼠顆粒酶B(Gzms-B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 鹽酸芬戈莫德(標準品) Fingolimod HCL /FTY-720 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
BAD蛋白共沉淀分析試劑盒5 氟芬那酸,氟滅酸 Flufenamic acid 質(zhì)量規(guī)格:>99%
MouseinhibinB,INH-BELISA試劑盒小鼠抑制素B(INH-B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 氟芬那酸,氟滅酸(標準品) Flufenamic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標準品
小鼠雙酪酸(dityrosine)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 氟馬西尼/氟馬澤尼 Flumazenil 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP31
Rat maix metalloproteinase 13 (MMP-13) ELISA Kit 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA試劑盒 氟馬西尼/氟馬澤尼(標準品) Flumazenil 質(zhì)量規(guī)格:>99%,標準品
小鼠胰島細胞說明大鼠白介素23(IL-23)ELISA檢測試劑盒RatIerleukin23,IL-23ELISAKit 96T/48T 檸檬酸 HPLC≥98% 5mg
大鼠白三烯C4(LTC4)ELISA檢測試劑盒RatLeukoieneC4,LT-C4ELISAKit 96T/48T 檸檬酸 HPLC≥98% 200mg
大鼠白三烯E4(LTE4)ELISA檢測試劑盒RatleukoieneE4,LT-E4ELISAKit 96T/48T 檸檬醛(>95%,Pract Grade) Citral 質(zhì)量規(guī)格:>95%,Pract Grade
大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA檢測試劑盒RatCystatinC,Cys-CELISAKit 96T/48T 檸檬醛 GC≥95% 0.5ml
大鼠補體蛋白3(C3)ELISA檢測試劑盒RatCompleme3,C3ELISAKit 96T/48T 檸檬苦素;吳茱萸內(nèi)酯(標準品,吳茱萸提取) Limonin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品,吳茱萸提取
大鼠補體蛋白4(C4)ELISA檢測試劑盒RatCompleme4,C4ELISAKit 96T/48T 檸檬苦素,黃柏內(nèi)酯(橙皮提取) Limonin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,橙皮提取
大鼠補體片斷3a(C3a)ELISA檢測試劑盒RatComplemefragme3a,C3aELISAKit 96T/48T 檸檬苦素,黃柏內(nèi)酯(標準品,橙皮提取) Limonin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品,橙皮提取
大鼠補體片斷5a(C5a)ELISA檢測試劑盒RatComplemefragme5a,C5aELISAKit 96T/48T 檸檬苦素 HPLC≥98% 20mg
大鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA檢測試劑盒RathighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit 96T/48T 檸檬黃素 HPLC≥95% 20mg
大鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA檢測試劑盒RatSuperOxidaseDimase,SODELISAKit 96T/48T 鎳粉(>99.5%,SP) Nickel powder 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%,SP