ROS活性氧抑制劑 / ROS清除劑10ml使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
ROS活性氧抑制劑 / ROS清除劑10ml使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
PC-12(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
肺成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CDH1 Others Rat 大鼠 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
CCRF-CEM細(xì)胞,人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞 小鼠白血病細(xì)胞,C3細(xì)胞 人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞cDNAHHSEC cDNA
大鼠肝細(xì)胞;BRL
CT26.WT(小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0198RM-1(小鼠前列腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WD10
小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞MM
FAM19A2 Others Human 人 FAM19A2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠甲狀腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
AML-12小鼠正常肝細(xì)胞 Normal liver cells of AML-12 mice DMEM+10%FBS
EGF Protein Mouse 重組小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
SMC-1(人胸膜瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 胃黏膜上皮Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
STK40 Others Human 人 STK40 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞;HFSF
CL-0274EJ(人膀胱癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
293T, SV40轉(zhuǎn)化的人胚腎上皮細(xì)胞系 小鼠原B細(xì)胞,BA/F3細(xì)胞 Hs 181.Tes(正常人細(xì)胞)
人肺粘液上皮樣癌細(xì)胞;NCI-H292
MET Others Human 人 c-MET / HGFR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠胎盤生長因子(PLGF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人褪黑素(MT)免疫試劑盒 Human Melatonin,MT ELISA Kit
糖原含量測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
RatSolubleIntercellularAdhesionMolecule1,sICAM-1ELISA試劑盒大鼠可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanIntestinaltrefoilfactor,ITFELISA試劑盒人腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanMyosinlightChain,MLCELISAKit人肌球蛋白輕鏈(MLC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔子端粒酶(TE)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human Trichinella antibody (Trichinella Ab) ELISA Kit 人旋毛蟲抗體(Trichinella Ab)ELISA試劑盒
Humananti-lymphocytotoxicantibody,ALA/LCAELISAKit 人抗淋巴細(xì)胞毒抗體(ALA/LCA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanEpidermalgrowthfactor,EGFELISA試劑盒人表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織PLK3激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
HumanPancreaticAmylase,PAMYELISAKit人胰*(PAMY)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
ROS活性氧抑制劑 / ROS清除劑10ml使用說明書人白介素21(IL-21)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人白介素2(IL-2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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