收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒(méi)有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
大鼠腦膜成纖維細(xì)胞【Rat Brain: Normal Brain Meningeal Fibroblasts】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠腦膜成纖維細(xì)胞直銷 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-963917 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)羧轉(zhuǎn)鐵蛋白(CMansferrin-zymography電泳分析試劑盒(MMP7)5 硬脂酸鋰(>98%,BR) Lithium stearate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11)ELISA檢測(cè)試劑盒Monkeymaixmetalloproteinase11,MMP11 96T/48T 硫酸鋰一水(分子生物學(xué)級(jí)) Lithium sulfate monohydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,分子生物學(xué)級(jí)
基質(zhì)金屬蛋白酶3抑制劑(NNGH)500微升 L-蘇糖酸鈣(>99%,BR) L-Threonic acid calcium salt 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
基質(zhì)金屬蛋白酶3抑制劑(NNGH)500微升 L-酪氨酸二鈉鹽(>98%,BC) L-Tyrosine di salt hydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BC
基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMP1/2/3)逆相明膠酶譜法(reversegelatin-zymography)電泳分析試劑盒(不含標(biāo)準(zhǔn)樣)5 魯米諾鈉(>98%,BS) Luminol, salt 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BS
激肽釋放酶(KALLIKREIN)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20 -6氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(>98%,BR) Magenta-Gal 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
技術(shù)平臺(tái)操作20樣本 -6氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(>98%,BR) Magenta-Gal 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
寄生蟲總RNA分離試劑盒20 檸檬酸鎂九水(>98%,BR) Magnesium nonahydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
甲RNA電泳上樣緩沖液(RNA酶保護(hù))10毫升 十二烷基硫酸鎂(分子生物學(xué)) Magnesium dodecyl sulfate 質(zhì)量規(guī)格:>85%,分子生物學(xué)級(jí)
甲變性RNA垂直電泳全套試劑盒10 氟化鎂(>98%,BR) Magnesium fluoride 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
小鼠葡萄糖60酸脫氫酶(G6PD)ELISA試劑盒 ,英文名: G6PD ELISA Kit 去離子甲酰胺 Formamide deionized 質(zhì)量規(guī)格:>99%,分子生物學(xué)級(jí)
小鼠白三烯B4(LTB4)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit 96T/48T 石蠟油 Paraffin oil, light fraction 質(zhì)量規(guī)格:分子生物學(xué)級(jí),PCR Grade
人分泌型卷曲相關(guān)蛋白2(SFRP2)試劑盒 Human SFRP2 ELISA Kit 乙酸鉀 Potassium acetate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,分子生物學(xué)級(jí)
Ratkeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit大鼠角化細(xì)胞因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 無(wú)水乙酸鈉 acetate, anhydrate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,分子生物學(xué)級(jí)
CDKN2A基因化程度定量分析試劑盒20 低熔點(diǎn)瓊脂糖;具有低凝膠溫度的瓊脂糖 Agarose, low gelling temperature 質(zhì)量規(guī)格:BR;具有低凝膠溫度
MouseMotilin,MTLELISA試劑盒小鼠胃動(dòng)素(MTL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 無(wú)水二氫鉀 Potassium phosphate, monobasic, anhydrous 質(zhì)量規(guī)格:>99%,分子生物學(xué)級(jí)
小鼠破骨細(xì)胞分化因子(ODF)ELISA試劑盒 ,英文名: ODF ELISA Kit 6-芐氨基嘌呤 6-Benzylamino purine 質(zhì)量規(guī)格:>99%
小鼠白介素1β(IL-1β)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseIerleukin1β,IL-1βELISAKit 96T/48T 水(HPLC grade) Water 質(zhì)量規(guī)格:HPLC grade
人分泌型卷曲相關(guān)蛋白1(SFRP1)試劑盒 Human SFRP1 ELISA Kit 馬來(lái)酸,順丁烯二酸 Maleic acid 質(zhì)量規(guī)格:AR,HPLC>99%
RatKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISAKit大鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 硫酸銨 Ammonium sulfate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,分子生物學(xué)級(jí)
大鼠腦膜成纖維細(xì)胞直銷大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)試劑盒 Rat ansforming Growth Factor β1,TGF-β1 ELISA kit 硫酸鎂無(wú)水(分子生物學(xué)級(jí)) Magnesium sulfate anhydrous 質(zhì)量規(guī)格:>99%,分子生物學(xué)級(jí)
大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1受體(TGF-β1R)試劑盒 Rat ansforming Growth factor β1 receptor,TGF-β1R ELISA kit 硫酸鎂七水(分子生物學(xué)級(jí)) Magnesium sulfate, heptahydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,分子生物
大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGF-β2)試劑盒 Rat ansforming Growth factor β2,TGF-β2 ELISA kit 硫酸鋁十六水(>98%,BR) Aluminum sulfate, hexadecahydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2受體(TGF-β2R)試劑盒 Rat ansforming growth factor β2 receptor,TGF-β2R ELISA Kit 硫酸鋁鉀十二水(>99%,BR) Aluminum potassium sulfate docecahydrate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3(TGF-β3)試劑盒 Rat ansforming Growth factor β3,TGF-β3 ELISA Kit 硫酸鏈霉素滅菌溶液,30 mg/ml Streptomycin sulfate solution, 30 mg/ml 質(zhì)量規(guī)格:Sterile滅菌溶液,30mg/ml
大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β刺激蛋白22(TSC22)試劑盒 Rat ansforming growth factor-beta-stimulated Protein clone-22,TSC22 ELISA Kit 硫酸鏈霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) Streptomycin Sulphate 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
大鼠轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(T)試劑盒 Rat ansthyretin,T ELISA Kit 硫酸鏈霉素 Streptomycin Sulphate 質(zhì)量規(guī)格:>720IU/MG,BR
大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratansferrieceptor,TFRELISAKit 96T/48T 硫酸聯(lián)氨(AR) Hydrazine sulfate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR
大鼠轉(zhuǎn)移抑制基因KISS1蛋白(KISS1/Kisspeptin 1)試劑盒 Rat Kisspeptin 1,KISS1 ELISA Kit 硫酸鋰一水(分子生物學(xué)級(jí)) Lithium sulfate monohydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,分子生物學(xué)級(jí)
大鼠組胺(HIS)ELISA檢測(cè)試劑盒RatHistamine,HISELISAKit 96T/48T 硫酸鋰(>98%,BR) Lithium sulfate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR