電泳級(jí)溴酚藍(lán)溶液10mL保存后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開(kāi),直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過(guò)同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開(kāi),用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過(guò)來(lái),然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
電泳級(jí)溴酚藍(lán)溶液10mL保存詳細(xì)介紹:
電泳級(jí)溴酚藍(lán)溶液10mL保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開(kāi)即用,十分方便,免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱(chēng)取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對(duì)長(zhǎng)度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
電泳級(jí)溴酚藍(lán)溶液10mL保存使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿(詳見(jiàn)該產(chǎn)品的使用手冊(cè))。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過(guò)硫酸銨溶液 精確稱(chēng)取約 100 mg 過(guò)硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過(guò)硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時(shí)間不要超過(guò)一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來(lái)以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會(huì)溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過(guò)硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過(guò)度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來(lái)。
家兔皮膚細(xì)胞;DR-S1
FSTL5 Others Human 人 FSTL5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
氣管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
TALL-104細(xì)胞,急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 KM小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤瘤株,G422細(xì)胞 人淋巴成纖維細(xì)胞裂解物HLFL
NCI-H2170(人肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
Calu-1(人肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0054Calu-3(人肺腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;PA317
STK4 Others Human 人 STK4 / MST1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人腦干星形膠質(zhì)細(xì)胞HA-bs
猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞;ELS1
BALB/3T3細(xì)胞,BALB/C小鼠胚成纖維細(xì)胞 人胰腺癌細(xì)胞,PC-2細(xì)胞 CM-M024小鼠淋巴成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠骨肉瘤細(xì)胞;UMR-106
CDH1 Others Human 人 Cadherin-1 / CDH1 / CD324 / E-cadherin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人腦干星形膠質(zhì)細(xì)胞HA-bs
STK4 Others Human 人 STK4 / MST1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞;ELS1
BALB/3T3細(xì)胞,BALB/C小鼠胚成纖維細(xì)胞 人胰腺癌細(xì)胞,PC-2細(xì)胞 CM-M024小鼠淋巴成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠骨肉瘤細(xì)胞;UMR-106
CDH1 Others Human 人 Cadherin-1 / CDH1 / CD324 / E-cadherin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
HO-2 ELISA Kit 大鼠血紅素氧合酶2Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-WWOX 包含氧化還原酶的WW域抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh G3BP1 Ras GTP酶活化蛋白結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
GM-CSF(Human Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor) ELISA Kit 人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子 96T
NPTX1 英文名稱(chēng): 神經(jīng)細(xì)胞正五聚體1抗體 0.1ml
Argininosuccinate Lyase 英文名稱(chēng): 琥珀酸裂解酶抗體 0.2ml
Anti-WWOX 包含氧化還原酶的WW域抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-human IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的羊抗人IgG 0.1ml
G protein alpha 13 英文名稱(chēng): G蛋白結(jié)合蛋白α13/Gα13抗體 0.2ml
β-乳球蛋白抗體 anti-bov β-lactoglobulin 1.0ml
Anti-NIS/FITC 熒光素標(biāo)記鈉碘轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PPM2C 蛋白磷酸酶2C抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-WIG-1/FITC 熒光素標(biāo)記野生型p53誘導(dǎo)基因1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
電泳級(jí)溴酚藍(lán)溶液10mL保存IL-22 小鼠白介素-22Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-ERK1(Thr197/Thr202) 磷酸化原活化蛋白激酶1/2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh MTCP1 成熟T淋巴細(xì)胞增殖蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
PS(Human plasma anticoagulant protein S) ELISA Kit 人血漿抗凝蛋白S 96T
SKAP55 英文名稱(chēng): SKAP55蛋白抗體 0.1ml
CD272 英文名稱(chēng): B和T淋巴細(xì)胞衰減蛋白抗體 0.1ml
Anti-phospho-ERK1(Thr197/Thr202) 磷酸化原活化蛋白激酶1/2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml