預混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (19:1)100g保存后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉移到帶正電的尼龍膜上,然后進行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經過同位素標記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向對置進行放射自顯影。
預混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (19:1)100g保存產品及特點:
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產品。它具有下列特點: 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 的 RNA 進行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
預混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (19:1)100g保存使用方法:
一、準備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應效率)。但如果實驗條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 和 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 和 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
猴腎細胞;Vero IgCD4
FST Others Mouse 小鼠 Follistatin / FST 人細胞裂解液 (陽性對照)
HPB-ALL(懸浮) T細胞白血病
769-P人腎細胞腺癌細胞 769-P human renal cell carcinoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
VEGFC Protein Rat 重組大鼠 VEGFC / VEGF-C 蛋白 (aa 108-223, Fc 標簽)
大鼠海馬趾星形膠質細胞(RAh)(5×105) ACHN, 人腎細胞腺癌細胞 Human
IL6ST Others Cynomolgus 食蟹猴 IL6ST / gp130 人細胞裂解液 (陽性對照)
人腦瘤細胞;SF763
CM-H122人神經星形膠質細胞*培養(yǎng)基100mL
(+)9811細胞,人胃癌細胞 人骨肉瘤細胞,SP20細胞 人胚胎眼鞏膜成纖維細胞;HFSF
DU 145(人前列腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
CA12 Others Mouse 小鼠 Ca12 / Car12 人細胞裂解液 (陽性對照)
人腦瘤細胞;SF763
IL6ST Others Cynomolgus 食蟹猴 IL6ST / gp130 人細胞裂解液 (陽性對照)
CM-H122人神經星形膠質細胞*培養(yǎng)基100mL
(+)9811細胞,人胃癌細胞 人骨肉瘤細胞,SP20細胞 人胚胎眼鞏膜成纖維細胞;HFSF
DU 145(人前列腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
CA12 Others Mouse 小鼠 Ca12 / Car12 人細胞裂解液 (陽性對照)
sIgA ELISA Kit 大鼠分泌型免疫球蛋白AMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-WRCH-1 WRCH1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh G6PD/Glucose 6 Phosphate Dehydrogenase 葡萄糖-6磷酸脫氫酶抗體 規(guī)格 0.1ml
AcSDKP ELISA Kit 大鼠N-乙酰基-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸 96T
NUP160 英文名稱: 核孔蛋白NUP160抗體 0.2ml
Arginyl tRNA synthetase 英文名稱: 精酰tRNA合成酶抗體 0.2ml
Anti-WRCH-1 WRCH1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-human IgG/Bio *標記的羊抗人IgG 0.1ml
GALC/Galactosylceramidase 英文名稱: 半乳糖神經酰胺酶抗體 0.2ml
Bcl-2抗體 Anti-Bcl-2 0.1ml
Anti-NGX6 /FITC 熒光素標記鼻咽癌細胞相關基因6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PPP2R3 蛋白質磷酸酶2A亞基3抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-WNT9A/WNT14/FITC 熒光素標記信號通路Wnt9a抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
預混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (19:1)100g保存Cytochrome-C 小鼠細胞色素CMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Fibulin 1 “衰老關鍵蛋白”抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Rabbit IgM/AP 堿性磷酸酶(AP)標記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格 0.1ml
AhR(Human aryl hydrocarbon receptor) ELISA Kit 人芳香烴受體 96T
SIX2 英文名稱: 轉錄因子同源框蛋白SIX2抗體 0.2ml
CD163L1 英文名稱: CD163蛋白樣1抗體 0.1ml
Anti-Fibulin 1 “衰老關鍵蛋白”抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml