4× 核酸液相雜交液10mL說明書詳細(xì)說明書:
4× 核酸液相雜交液10mL說明書使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液.
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時(shí),乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時(shí),請?jiān)诘?/span> 8 步之后進(jìn)行。
4× 核酸液相雜交液10mL說明書確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進(jìn)行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預(yù)雜交步驟 預(yù)雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進(jìn)行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點(diǎn)封閉,否則這些位點(diǎn)會吸附標(biāo)記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預(yù)先封口,再剪掉一角, 留一個(gè)小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機(jī)將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時(shí),延長到 12-16 小時(shí)亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停 的搖動狀態(tài)中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
4× 核酸液相雜交液10mL說明書步驟:
1. 如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計(jì)算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機(jī)封口)。探針的加入量視探針標(biāo)記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應(yīng)加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時(shí)間一般為 6-12 小時(shí)。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
大鼠游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒 ,英文名: FT4 ELISA Kit
人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA檢測試劑盒Humanneutrophilelastase,NEELISAKit 96T/48T
大鼠白介素1β(IL-1β)免疫試劑盒 Rat Interleukin 1β,IL-1β ELISA Kit
CLIAKitforTCCC5b-9(MouseterminalcomplementcomplexC5b-9)ELISAKit小鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9規(guī)格:48T/96T
人體HLA-DPB1RFLP基因分析試劑盒20次
ELISAKitTTN人抗肌聯(lián)蛋白抗體規(guī)格:48T/96T
大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/AgBⅡ/H-1Ⅱ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血管舒緩激肽(BK)免疫試劑盒 Human Bradykinin,BK ELISA Kit
人抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)ELISA試劑盒 ,英文名: LSP ELISA Kit
RatInterleukin16,IL-16ELISA試劑盒大鼠白介素16(IL-16)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanglucokinaseregulatoryprotein,GKRPELISA試劑盒人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GKRP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInterleukin5,IL-5ELISAKit人白介素-5(IL-5)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat endocrine gland vascular endothelial growth factor (EG-VEGF) ELISA Kit 大鼠內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒
Humanthrombospondin1,TSP-1ELISAKit 人血小板反應(yīng)蛋白/*敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanApolipoproteinE,Apo-EELISA試劑盒人載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物葉綠體F型ATP酶(FtypeATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20次
humantoll-likereceptor2,TLR2ELISAKit人toll樣受體2(TLR2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
13(S)-HODE cholesteryl ester (25 ug) 13S-xy7noxy-9Z,11E-octadecadienoic acid, cholesteryl ester; 13(S)-HODE cholesteryl ester
Darapladib (10 mg) SB 480848; N-[2-(dietxylamino)etxyl]-2-[[(4-fluoropxenyl)metxyl]thio]-4,5,6,7-tetraxy7no-4-oxo-N-[[4’-(trifluorometxyl)[1,1’-bipxenyl]-4-yl]metxyl]-1H-cyclopentapyrimidine-1-acetamide
鬼筆環(huán)肽-Fluorescein偶聯(lián)物 Phalloidin-Fluorescein Conjugate
Dibutyl-3-xy7noxybutyl Phosphate (25 mg) dibutyl 3-xy7noxybutyl esterdibutyl 3-xy7noxybutyl ester-phosphoric acid; TBP-OH; Dibutyl-3-xy7noxybutyl Phosphate
Elaidic Acid (1 g) 9E-octadecenoic acid; trans-Oleic Acid; Elaidic Acid
(3aR, Cantharidin
HBVpol502, HBV polymerase (502-510)Lys-Leu-His-Leu-Tyr-Ser-His-Pro-Ile
β II probeSer-Ser-Leu-Asp-Leu-Ser-Gln-Phe-Pro-Met-Thr-Ala-Ser-Phe-Leu-Arg-Glu-Ser-Arg
[pSer5]-Kemptide, BiotinylatedBiotin-Leu-Arg-Arg-Ala-Ser(PO3H2)-Leu-Gly
Boc-GRR-AMCBoc-Gly-Arg-Arg-AMC
Pannexin-1 Fragment (4512)Val-Gln-Gln-Lys-Ser-Ser-Leu-Gln-Ser-Glu-Ser-Gly-Asn
4× 核酸液相雜交液10mL說明書聚乙二醇400Polyetxylene Glycol 400CP500mL
MD25-3.5透析袋(半周長25mm,直徑16mm,截留分子量3500Da)5米/卷0
C0182-5gCytidine 胞嘧啶核苷65-46-35g
Long Taq DNA聚合酶250U
litxium Dodecyl Sulfate25g