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| 產(chǎn)品名稱 | EPI300 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*20 |
| 包裝 | 50ul*20 |
| 分類 | 克隆感受態(tài)細(xì)胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。
shēng huà shì jì 微量可調(diào)移液器P2 容量： 保存：-20℃ 100毫克
shēng huà shì jì 微量可調(diào)移液器P1000 容量： 25克
shēng huà shì jì 微量可調(diào)移液器P100 容量： 保存：-20℃ 1克
shēng huà shì jì 微量可調(diào)移液器P10 容量： 保存：-20℃ 1克
shēng huà shì jì 微量可調(diào)八道移液器P50 容量： 保存：-20℃ 1克
shēng huà shì jì 微量可調(diào)八道移液器P300 容量： 保存：-20℃ 250毫克
shēng huà shì jì 微量可調(diào)八道移液器P10 容量： 2～8℃ 1克
shēng huà shì jì 微孔濾膜（混纖） 容量： 保存：-20℃ 25毫克
shēng huà shì jì 微晶纖維素板 容量： 2～8℃ 1克
shēng huà shì jì 微晶纖維素 容量： 100克
shēng huà shì jì 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)液 容量： 1公斤
shēng huà shì jì 王樹(shù)脂 容量： 25克
shēng huà shì jì *培養(yǎng)基 容量： 2～8℃ 25毫升
shēng huà shì jì 彎曲菌血瓊脂基礎(chǔ) 容量： RT 支
EPI300 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*20shēng huà shì jì 唾液酸測(cè)試盒（帶SA標(biāo)準(zhǔn)） 容量
大鼠乙酰* 規(guī)格： 48T/96T
ALDH 大鼠乙醛脫氫酶 規(guī)格： 48T/96T
ADH 大鼠乙醇脫氫酶 規(guī)格： 48T/96T
Glp-1 大鼠胰高血糖素樣肽1 規(guī)格： 48T/96T
Amylin 大鼠胰淀素 規(guī)格： 48T/96T
ICA 大鼠胰島細(xì)胞抗體 規(guī)格： 48T/96T
IAA 大鼠胰島素自身抗體 規(guī)格： 48T/96T
PI 大鼠胰島素原 規(guī)格： 48T/96T
IGFBP-4 大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4 規(guī)格： 48T/96T
IGFBP-3 大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3 規(guī)格： 48T/96T
IGFBP-2 大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2 規(guī)格： 48T/96T
IGFBP-1 大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1 規(guī)格： 48T/96T
IGF-2 大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子2 規(guī)格： 48T/96T
IGF-1 大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子1 規(guī)格： 48T/96T
ISR-β 大鼠胰島素受體β 規(guī)格： 48T/96T
INS 大鼠胰島素 規(guī)格： 48T/96T
TAP 大鼠*原激活肽 規(guī)格： 48T/96T
： RT 個(gè)
注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
