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產品名稱 | Stbl3 電擊感受態(tài)細胞 50ul*5 |
包裝 | 50ul*5 |
分類 | 克隆感受態(tài)細胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
操作方法:
1. 從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質粒或連接產物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
IFA 人抗內因子抗體 規(guī)格: 48T/96T
AECA 人抗內皮細胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
AGA 人抗麥膠蛋白/麥醇溶蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
AGA 人抗麥膠蛋白/麥醇溶蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
AOAb 人抗卵巢抗體 規(guī)格: 48T/96T
EHF 人抗流行性出血熱病毒抗體IgM 規(guī)格: 48T/96T
EHF 人抗流行性出血熱病毒抗體IgM 規(guī)格: 48T/96T
EHF 人抗流行性出血熱病毒抗體IgG 規(guī)格: 48T/96T
APSA 人抗磷脂酰*抗體 規(guī)格: 48T/96T
APSA 人抗磷脂酰*抗體 規(guī)格: 48T/96T
Apl/APA 人抗磷脂抗體 規(guī)格: 48T/96T
TA 人抗磷壁酸抗體 規(guī)格: 48T/96T
TA 人抗磷壁酸抗體 規(guī)格: 48T/96T
ALG 人抗淋巴細胞球蛋白 規(guī)格: 48T/96T
ALA 人抗淋巴細胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
ASO 人抗鏈球菌溶血素O/抗O 規(guī)格: 48T/96T
ADH/VP/AVP 人抗利尿激素/*加壓素 規(guī)格: 48T/96T
SCA 人抗類固醇細胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
RANA 人抗類風濕關節(jié)炎核抗
2-溴-6-氟苯甲酸 2252-37-1
3-三氟甲氧基溴苯 2252-44-0
2-氯-5-甲氧基嘧啶 22536-65-8
異硫氰酸異丙酯 2253-73-8
三乙基硼氫化鋰 22560-16-3
1,3-二氟-5-碘苯 2265-91-0
仲丁醇鋁 2269-22-9
Stbl3 電擊感受態(tài)細胞 50ul*55-甲基* 22717-57-3
二氫雙(2-甲氧乙氧基)鋁酸鈉 22722-98-1
2,3-二氫-1-苯并呋喃-5-基硼酸 227305-69-3
磷酸三鉀(三水合物) 22763-03-7
D(-)-對羥基苯* 22818-40-2
* 22832-87-7
Boc-D-* 22838-58-0
2-溴-5-甲氧基苯甲酸 22921-68-2
二氫-3(2H)-呋喃酮 22929-52-8
2,4-噻唑烷二酮 2295-31-0
2-氯-5-硝基-4-甲基吡啶 23056-33-9
2-氯-4-硝基吡啶 23056-36-2
3-氯苯肼鹽酸鹽 2312-23-4
6-三氟甲基* 231291-22-8
(1R,2S)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇 23190-16-1
L-脯氨醇 23356-96-9
(R)-(-)-1,2,3,4-四氫-1-萘胺 23357-46-2
對三氟甲基酸甲酯 2338-75-2
原抗體 規(guī)格: 48T/96T
RANA 人抗類風濕關節(jié)炎核抗原抗體 規(guī)格: 48T/96T
注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?;蜻B接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?;蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟:
1.取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2.待感受態(tài)細胞融化后,向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘
4.每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
5.根據實驗需求,取適量已轉化的感受態(tài)細胞,加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時。