實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
泰國利什曼原蟲PCR熒光定量檢測試劑盒 | Leishmania siamensisPCR | 多種規(guī)格 | BJ-P6927 |
特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲存條件:-20℃以下,有效期12個月。
二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設立一個專用的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。 7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū),并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
吖啶黃素(5.0mg) Acridine flavin 5mg*53%氯化鈉堿性蛋白胨水進口、國產(chǎn)Alkaline Peptone Water250克副溶血性弧菌的選擇性
1瓶 AsPC-1株 AsPC-1 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Acetolactate synthase-like protein
50T 戊型肝炎病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人線粒體睪丸特形丙酮酸脫氫E1亞基α(PDHE1-A type II)ELISA試劑盒
沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)(2015藥典) Sabouraud Dextrose Agar 250g 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP8
無機磷培養(yǎng)基(不含瓊脂)(測磷細菌解磷效能) 250g胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎進口、國產(chǎn)Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base250克蠟樣芽孢桿菌的溶血測試驗
50T 空腸彎曲菌PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Mucin-5AC
150mL 丙烯葡聚糖凝膠 S-200 HR Sephacryl S-200 HR 室溫保存 0.78-50 ng/mL 馬鈴薯特定基因序列(PATA)核酸檢測試劑盒
最小肉湯培養(yǎng)基 the Smallest Broth Medium 250g
250mL 消化液(含EDTA) Trypsin Solution -20℃保存 0.156-10 ng/mL 豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-U)核酸檢測試劑盒
1瓶 Y1株 Y1 低溫運輸和保存 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Protein kinase C epsilon type
250mg D- 氨基半乳糖鹽酸鹽 D(+)Galactosamine Hydrochloride 4℃保存
泰國利什曼原蟲PCR熒光定量檢測試劑盒SNS-032 CDK抑制劑(SNS-032) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
PI-103 Hydrochloride PI3K/AktandmTOR抑制劑 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
D4476 CK1抑制劑(D4476) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
GDC-0152 IAPs抑制劑(GDC-0152) 1mL(10mM)|10mg|50mg
GSK-J1 KDM6A/KDM6B抑制劑(GSK-J1) 1mL(10mM)|10mg|50mg
NU 7026 DNA-PK抑制劑(NU7026) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
MLN8054 Aurora A抑制劑 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
Idarubicin hydrochloride DNA拓撲異構酶II抑制劑 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
BMS-754807 胰島素受體抑制劑(BMS-754807) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
D8-MMAE 微管蛋白聚合抑制劑(D8-MMAE) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg
LY3009120 RAF抑制劑(LY3009120) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg