操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96490 |
商品屬性：
名稱 NIH/3T3 (小鼠胚胎細胞) 別稱NIH/3T3; NIH-3T3; NIH3T3; 3T3; 3T3NIH; 3T3-Swiss; Swiss-3T3; Swiss/3T3; Swiss 3T3; Swiss3T3 種屬小鼠 年齡（性別）胚胎 組織來源胚胎 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 背景描述NIH/3T3細胞是從NIH Swiss小鼠胚胎培養(yǎng)物中建立的高度接觸性抑制的連續(xù)傳代細胞株。為了培育在形態(tài)學特征上更適合于進行轉化分析的亞株，建立的NIH/3T3細胞株又進行了5輪以上亞克隆。NIH/3T3細胞對肉瘤病毒的轉化灶形成和白血病病毒的繁殖高度敏感，對DNA轉化及轉染研究十分有用；NIH/3T3細胞鼠痘病毒陰性。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM＋10% CS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~20小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人 TGFBR1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 E-Cadherin 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
人 EREG 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
人 TGFA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠 CD16-2 / FCGFR4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 MS4A1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
人 PRICKLE2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
人 PMP22 基因
NIH/3T3 (小鼠胚胎細胞)50mL EGTA Solution（EGTA溶液）,1M,pH8.0 EGTA Solution,1M,pH8.0 常溫保存大腸桿菌顯色培養(yǎng)基配套平皿進口、國產(chǎn)E.Coli Chromogenic Medium Dish9㎝/塊
Tergitol-7瓊脂 Tergitol-7 Agar 250g 7.8-500 pg/mL 人降鈣素(CT)ELISA試劑盒
250mg Rifampicin -20℃保存
卵黃培養(yǎng)基基礎 Egg-Yolk Mannitol Salt agar Base 250g
50T 犬瘟熱病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Sclerostin
10mL 石蠟油，PCR級 Paraffin，PCR Grade 常溫 78-5000 pg/mL 人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒
2 ug pHelper pHelper 低溫運輸，-20℃保存
1瓶 EJ株 EJ 低溫運輸和保存 0.312-20 ng/mL 人早老素增強蛋白2 ELISA試劑盒
1瓶 Sp2/0-Ag14株 Sp2/0-Ag14 低溫運輸和保存 0.78-50 ng/mL 人γ轉移1(GGT1)ELISA試劑盒
2 ug pLVX-EF1α-DsRed-Monomer-N1 pLVX-EF1α-DsRed-Monomer-N1 低溫運輸，-20℃保存3.5% NaC1葡萄糖鹽胨水發(fā)酵管進口、國產(chǎn)3.5% NaC1葡萄糖鹽胨水發(fā)酵管20支BR
1瓶 Raji株 Raji 低溫運輸和保存 78-5000 pg/mL 人抑制素A(INH-A)ELISA試劑盒
