商品介紹:
測(cè)定意義: APX是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗壞血酸代謝的關(guān)鍵酶之一。APX具有多種同功酶,分別定位于葉綠體、胞質(zhì)、線粒體、過(guò)氧化物和乙醛酸體,以及過(guò)氧化體和類囊體膜上。APX 催化 AsA 還原 H2O2,是 植物AsA 的主要消耗者。APX的活性直接影響到AsA的含量,在脅迫和解脅迫條件下,APX與AsA具有一定的負(fù)相關(guān)性。 測(cè)定原理: APX 催化 AsA 還原 H2O2,通過(guò)測(cè)定AsA的氧化量可計(jì)算得APX活力。 實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備: 研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1ml石英比色皿、移液槍、雙蒸水。 |
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
抗壞血酸過(guò)氧化物酶(APX)紫外分光光度法 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | BJ-0161142-2 |
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測(cè)定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測(cè)樣品-70℃可保存1個(gè)月。需注意反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致SOD部分失活。
一個(gè)試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時(shí)適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測(cè)效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時(shí),標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無(wú)需處理的樣品時(shí),宜使用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會(huì)使測(cè)定出來(lái)的吸光度顯著升高。此時(shí)盡管樣品沒有顏色,如果設(shè)置了使用說(shuō)明中的空白對(duì)照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約50分鐘,可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測(cè)紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測(cè)白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測(cè)組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測(cè)線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
鋅指蛋白ZBTB7C抗體桔林油脂酵母UTP 溶液,2.5mM2mL
鋅指蛋白ZBTB8A抗體淡紫擬青霉菌(現(xiàn)1)NMY51 酵母感受態(tài)10×100μL
鋅指蛋白916B抗體副豬嗜血桿菌dNTP 和引物清除劑100 次
鋅指蛋白903抗體小麥粉 水分、灰分 Taq 酶抗體1000U
鋅指蛋白923抗體豇豆慢生根瘤菌植物種屬鑒定 PCR Mix 3100 次
鋅指蛋白288抗體香菇植物種屬鑒定 PCR Mix 5100 次
鋅指蛋白185抗體大腸埃希氏菌加 T 試劑盒50 次
鋅指蛋白431抗體玫瑰擬層孔菌PCR LIC 克隆套裝1μg
鋅指蛋白379抗體黃赭色鏈霉菌DH10B 感受態(tài)0.1 mL×10
鋅指蛋白804A抗體球孢白僵菌Deaza dGTP0.4mL
鋅指蛋白693抗體淡紫紫霉m7G(5′)ppp(5′)G 帽結(jié)構(gòu)類似物25 OD規(guī)格
鋅指蛋白ZBTB3抗體葛氏菌質(zhì)粒 ( 載體 ) 系列產(chǎn)品2μg
著絲粒ZWILCH蛋白抗體產(chǎn)黃青霉接頭 DNA(BamH I(Bgl II)-Sma I)5nmol
鋅指蛋白57抗體鴿痘病dTTP 溶液,2.5mM2mL
鋅指蛋白717抗體霍氏分支桿菌克必隆零背景 T 載體20 次規(guī)格
抗壞血酸過(guò)氧化物酶(APX)紫外分光光度法血小板反應(yīng)蛋白4(TSP-4)試劑盒 Anti-EIF2B1 Antibody衰老抑制基因蛋白
間變性瘤激酶(ALK)試劑盒 Anti-EIF2AK4 Antibody中間絲相關(guān)蛋白
乳酸脫氫酶B(LDHB)試劑盒 Anti-EIF2S1 Antibody環(huán)指蛋白86
唾液酶α1(AMY1)試劑盒 Anti-EIF2S2 Antibody環(huán)指蛋白2
角膜蛋白(KERA)試劑盒Anti-EIF3E Antibody環(huán)指蛋白44
β樣前體蛋白(βAPP)試劑盒Anti-EIF4A1 Antibody環(huán)指蛋白40
胰島su樣生長(zhǎng)因子2受體(IGF2R)試劑盒Anti-EIF3B Antibody環(huán)指蛋白8