(貨號:JY0301)
工作原理:
本產(chǎn)品采用層析式雙抗體夾心法檢測Cas12/13的標記探針。用戶僅需在探針設計時將一端標記(Biotin),另一端標記異硫氰酸熒光素(FITC)或6-羧基熒光素(6-FAM),即可使用本產(chǎn)品檢測目的基因LAMP、MIRA、RAA或RPA等溫擴增后的Cas酶切產(chǎn)物。
預期用途:
核酸擴增產(chǎn)物的檢測。
包裝規(guī)格/貨號:
包裝規(guī)格:10條/包×5,鋁箔袋防潮包裝。
儲存條件及有效期:
儲存條件:存放于避光干燥處,儲存溫度4~30℃。
有效期:12個月。
操作步驟:
- 根據(jù)檢測樣品數(shù)量取出相應數(shù)量的試紙條,并在吸收墊(圖1)上做好標記。每根試紙條只能用于單次、單個樣品的檢測。擴增產(chǎn)物體積為50~100µL時,可直接在200µL PCR反應管中檢測核酸產(chǎn)物,產(chǎn)物體積不足50µL時,需在PCR管內(nèi)加超純水補足體積至50µL,吸打混勻后,才能進行檢測。
- PCR、RPA或RAA反應結(jié)束后,打開PCR反應管,將試紙條結(jié)合墊端(箭頭端)插入PCR反應管(圖1),液面不得超過結(jié)合墊最上端,待判讀區(qū)全部浸潤(約需1~2min,外界環(huán)境溫度較低時,如冬季,會降低吸水速度,判讀區(qū)浸潤時間將會延長),待質(zhì)控線(C線)顯色后,可以將試紙條拿出。根據(jù)試紙條顯色情況直接讀取檢測結(jié)果。
- 質(zhì)控線(T線)顯色后10min內(nèi)觀察結(jié)果,10min后判讀無效。
- 記錄檢測結(jié)果,將試紙條密封丟棄在安全處。
結(jié)果判讀:
- 陽性(+):
試紙條質(zhì)控線(C線)和檢測線(T線)均出現(xiàn)紅色條帶;試紙條質(zhì)控線(C線)不顯色,檢測線(T線)出現(xiàn)紅色條帶。上述兩種情況均說明Cas12/13可進行有效切割,并激活報告基團顯色,結(jié)果均可判定為陽性。
- 陰性(-):
試紙條質(zhì)控線(C線)出現(xiàn)一條紅色條帶,檢測線(T線)不顯色,判定為陰性結(jié)果。該結(jié)果表明Cas12/13未能切割報告分子,未能激活報告基團顯色。
- 無效:
試紙條質(zhì)控線(C線)和檢測線(T線)均未出現(xiàn)條帶,提示所用的試紙條或擴增試劑可能已經(jīng)損壞、失效或操作有誤。此時,應仔細閱讀說明書,重新擴增和檢測。如果問題仍然存在,應立即停止使用同一批號的產(chǎn)品,并與當?shù)毓搪?lián)系。
注意事項及安全提示:
- 本產(chǎn)品應結(jié)合探針使用,如探針合成純度不足,即探針含游離的Biotin或者游離的FITC時,會導致以超純水作陰性對照的切割產(chǎn)物T線顯紅色,即陰性對照呈現(xiàn)假陽性結(jié)果。
- 本產(chǎn)品可用于探針合成質(zhì)量的檢測。調(diào)整空白陰性對照中探針的使用濃度至200 nM,并進行切割反應。當試紙條結(jié)合墊端浸入Cas12/Cas13切割產(chǎn)物后的5~7 min內(nèi),試紙條T線顯紅色,即說明探針純度難以滿足實驗要求,會因探針純度不足導致假陽性結(jié)果。建議更換探針合成供應商,并重新合成探針。本產(chǎn)品在探針使用濃度為20~50nM的情況下,試紙條結(jié)合墊端浸入Cas12/Cas13切割產(chǎn)物后的30 min內(nèi),T線均不會顯色。
- 本產(chǎn)品僅供科研使用。使用前請仔細閱讀說明書,嚴格按照說明書操作。違反或者未按說明書進行操作可能導致錯誤結(jié)果。
- 產(chǎn)品應依照說明書要求,儲存于合適的環(huán)境和溫度下,并在有效期內(nèi)使用。儲存不當或產(chǎn)品過期可能導致錯誤結(jié)果。打開包裝后請盡快使用試紙條,以免因試紙條受潮影響試驗結(jié)果。檢測環(huán)境光線不足,操作者色弱等因素均可能導致錯誤結(jié)果。
使用完畢后,應盡快將紙條裝進密封袋,妥善處理。本產(chǎn)品為一次性使用產(chǎn)品,請勿重復使用。