一步法miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒-上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

產(chǎn)地	國(guó)產(chǎn)	加工定制	否
適用領(lǐng)域	科研	貨號(hào)	BJ-PJ6641
規(guī)格	25T 、100TX20μl	包裝	盒
用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

一步法miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒

商品屬性：

產(chǎn)品分類	規(guī)格	貨號(hào)
miRNA檢測(cè)系列	25T	BJ-PJ6641
miRNA檢測(cè)系列	100TX20μl	BJ-PJ6641

一步法miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒

商品介紹：

描述：由于 miRNAs 分子序列較小，僅 20nt 左右，沒(méi)有真核生物有的 Poly(A)尾巴結(jié)構(gòu)，采用傳統(tǒng) Oligo dT 引物和隨機(jī)引物很難獲得從 miRNA 到 cDNA 的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn) 物。公司開(kāi)發(fā)出一套全新的加 A 法 miRNA 反轉(zhuǎn) 錄試劑盒，基于 Peter 改良的 miR-Q 技術(shù)，可以對(duì)成熟的 miRNA 同時(shí)完成加 A 反應(yīng)和反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，直接獲得含有特異性 tag 和 15(T)的 cDNA 產(chǎn)物（如圖 1 所示）。該方法使得 miRNA 反轉(zhuǎn)錄與 mRNA 的反轉(zhuǎn)錄一樣輕松。直接將提取的 miRNA 與反應(yīng)緩沖液混合物混合，并置于 PCR 儀上 1 小時(shí)即可獲得高濃度的、包含所有 miRNAs 分子的 cDNA 產(chǎn)物。獲得的 cDNA 產(chǎn)物適用于 HG miRNA 熒光定量 PCR 試劑盒進(jìn)行定量檢測(cè)，該方法已被大量文獻(xiàn)所采用。

儲(chǔ)存：請(qǐng)置于-20°C，可保存 2 年；避免反復(fù)凍融
操作方法
1. 按以下組分配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液
miRNA（0.01-0.1 μg）or Total RNA 0.1-2 μg
4×One step miRNA RT Solution 5 μl
*10×miRNA RT Primer 2 μl
Rnase Free H2O Up to 20 μl
*特別說(shuō)明： 10×miRNA RT Primer 引物為
5’-CAGGTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTVN-3’，定量擴(kuò)增
用特異性上下游引物進(jìn)行擴(kuò)增，圖 2 是以 hsa-miR-21 為
實(shí)例說(shuō)明特異性上下游引物的設(shè)計(jì)方法
2. 在 PCR 儀上按以下條件進(jìn)行反應(yīng):
37°C 60min
95°C 5min
3. 獲得 cDNA 產(chǎn)物后使用 HG miRNA 熒光定量 PCR 試劑盒進(jìn)行 miRNA 定量檢測(cè)。

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