布氏桿菌染色液-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10122

產(chǎn)品介紹:

用途：

布氏桿菌染色，又稱為科茲洛夫斯基染色或柯茲洛夫斯基染色。

注意事項：

染色結(jié)果為：布氏桿菌呈球桿狀，淡紅色，其他呈綠色。

儲存條件：室溫，避光，12個月

中文名稱：布氏桿菌染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：2×50ml|2×100ml

貨號：FS-X10122

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

薄層菌屬絲裂原活化蛋白激3抗體Human INPPL1 (Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 2) 犬組織因子(TF)免疫試劑盒

總狀毛霉雌激受體α抗體Human HCAR3 (Hydroxycarboxylic acid receptor 3) 犬組(HIS)免疫試劑盒

土壤短芽胞桿菌雌激受體β 抗體Human UGT1A6(UDP-glucuronosyltransferase 1-6) 犬轉(zhuǎn)移生長因子β1(TGF-β1)免疫試劑盒

根霉上皮特異性抗原抗體Human IPMK (Inositol polyphosphate multikinase) 犬腫瘤壞死因子α(TNF-α )免疫試劑盒

頭孢霉內(nèi)皮-1抗體Human INPPL1 (Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 2) 犬脂多糖/內(nèi)(LPS)免疫試劑盒

黑曲霉天冬蛋白家族蛋白抗體Human UGT1A6(UDP-glucuronosyltransferase 1-6) 犬脂蛋白脂(LPL)免疫試劑盒

迂回殼囊孢蝮蛇蛇蛋白抗體Human HCAR2 (Hydroxycarboxylic acid receptor 2) 犬孕激/孕(PROG)免疫試劑盒

巴貝斯蟲未定種（伊寧株）轉(zhuǎn)錄因子E2F-2抗體Human HCAR3 (Hydroxycarboxylic acid receptor 3) 犬誘導(dǎo)型一氧化氮合成(iNOS)免疫試劑盒

天麻蜜環(huán)菌A9*內(nèi)皮受體蛋白酪激抗體Human INSM1(Insulinoma-associated protein 1) 犬游離脂肪(FFA)免疫試劑盒

棒彎孢酪蛋白激受體B2抗體Human HMGCS2 (Hydroxymethylglutaryl-CoA synthase, mitochondrial) 犬游離狀腺原(Free-T3)免疫試劑盒

蠟狀芽孢桿菌磷化雌激受體ER alpha 抗體Human INSM2 (Insulinoma-associated protein 2) 犬游離甲狀腺(FT4)免疫試劑盒

須芒草伯克霍爾德氏菌重組增強型綠色熒光蛋白抗體Human HEMK1 (HemK methyltransferase family member 1) 犬抑制β-B(Inhbb)免疫試劑盒

綠針假單胞菌雌激受體α抗體（用于western blot）Human HRAS(GTPase HRas) 犬乙型肝炎表面抗原(HBsAg)免疫試劑盒

雞葡萄球菌雌激受體α/β抗體Human HSD17B1(Estradiol 17-beta-dehydrogenase 1) 犬乙酰受體抗體(AChRab)免疫試劑盒

擬枝孢鐮孢自分泌運動因子抗體Human IL1RL2 (Interleukin-1 receptor-like 2) 犬胰腺甘油三酯脂(PNLIP)免疫試劑盒

平菇—紫孢側(cè)耳酪蛋白激A3受體抗體Human UGT1A1(UDP-glucuronosyltransferase 1-1) 犬胰高血糖樣肽1(GLP1)免疫試劑盒

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,99.5%吳茱萸總堿

假蜜環(huán)菌Armillariella│sp. 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,99.8%蘇糖

副溶血弧菌Vibrio│parahaemolyticus 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,≥98%阿卡波糖
布氏桿菌染色液松口蘑 3,4,5-三苯中性蛋白

巴斯德畢赤酵母 3-甲基噻吩抗壞血氧化

滑假絲酵母 N-氨基-3-氮雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷鹽鹽D-半乳糖酯還原

糙皮側(cè)耳 3,4-二肌加氧

孢籃狀 4-氨基-3-溴三氟甲苯麥角蛋白

美澳型核果褐腐病 4-羥基-2-甲姜辣

海境芽孢桿 5-羥基-2-甲果聚糖

大腸埃希磺脒Na-K-ATP

鄰單胞屬* 枸櫞鉍葡萄糖

葡萄座腔 D-對羥基苯甘甲酯鹽鹽木質(zhì)

大腸埃希 2-甲酯類黃酮葡萄糖轉(zhuǎn)移

動物源細耐藥性檢測板－金黃色葡球 5,5-二苯基海因霉

矩圓黑盤孢 4--3-溴甲苯ataxin-3抗體

卡爾斯伯酵母 2-甲氧基苯過氧化物

黃曲霉 4-甲苯果糖-1,6-二磷縮

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