精子活體染色液(伊紅法)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9930

產(chǎn)品介紹:

用途：

評(píng)估精子存活率，鑒別不活動(dòng)精子膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性

注意事項(xiàng)：

伊紅滴染法，可通過檢測(cè)精子膜的完整性來評(píng)價(jià)精子的存活率

儲(chǔ)存條件：室溫，12個(gè)月

中文名稱：精子活體染色液(伊紅法)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：10ml

貨號(hào)：FS-X9930

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

細(xì)長(zhǎng)賴芽胞桿菌巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白4抗體Human GINS3 小鼠αN已?；咸?αNAG)免疫試劑盒

葡萄座腔菌巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白7抗體Human GIPC2 小鼠αL巖藻糖(AFU)免疫試劑盒

白僵菌巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白9抗體Human GIT2 小鼠αL艾杜糖(IDUA)免疫試劑盒

淡紫擬青霉巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白10抗體Human GIPC1 小鼠α2抗纖溶(α2-AP)免疫試劑盒

釀酒酵母癌相關(guān)基因2抗體（鋅指蛋白364）Human GIPC2 小鼠α1微球蛋白(α1-MG)免疫試劑盒

桔橙鏈霉菌B淋巴酪激抗體Human GIT2 小鼠α1性糖蛋白(α1-AGP)免疫試劑盒

聚生殼菌腦特異性血管生成抑制蛋白2抗體Human GJB3 小鼠α1抗胰糜蛋白(AACT)免疫試劑盒

Maribius pelagius促凋亡BNIP3L蛋白抗體Human GK3P 小鼠α1干擾(IFN-α1)免疫試劑盒

費(fèi)氏桿菌費(fèi)氏亞種Bcl2抑凋亡蛋白Bag3抗體Human GJB6 小鼠Wnt-3a蛋白(WNT3A)免疫試劑盒

小孢毛霉BCL2樣10促凋亡蛋白抗體Human GIYD2 小鼠Wnt-10b蛋白(WNT10B)免疫試劑盒

黃微綠鏈霉菌BCL2樣12含脯蛋白抗體Human GFPT2 小鼠V-Ha-Ras肉瘤病癌基因同源物(HRAS)免疫試劑盒

黑曲霉BCL2分子伴侶調(diào)節(jié)蛋白5抗體Human Giantin 小鼠T活化連接蛋白(LAT)免疫試劑盒

谷棒桿菌Ⅰ型轉(zhuǎn)錄因子BTF3抗體Human GJC2 小鼠T表面糖蛋白CD3 epsilon鏈(CD3E/T3E)免疫試劑盒

貝倫格葡萄座腔菌Bcl2相互作用蛋白2抗體Human GFRA2 小鼠T白血病同源盒蛋白1(Tlx1/Hox11/Tlx-1)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌癌擴(kuò)增序列蛋白4抗體Human GFRA3 小鼠Toll樣受體7(TLR7)免疫試劑盒

大腸埃希菌磷化T淋巴受體抗體Human GIMAP5 小鼠Toll樣受體5(TLR-5)免疫試劑盒

結(jié)核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRβ基己糖A試劑盒去基雛葉龍膽

茄絲核菌Thanatephorus│cucumeris (A.B. Frank) Donk 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRβ4整合試劑盒羥基異亮

: ATCC29358資源名稱: 有害片球菌質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRβ2轉(zhuǎn)鐵蛋白試劑盒去氫松香
精子活體染色液(伊紅法)河流桿 3-氨基-2-氟隱孢子蟲抗體

鏈格孢（可訂購(gòu)） 1-Boc--3-甲酰芽囊原蟲抗體

孢小克銀漢霉輪生變種 5--2-甲氧基膜型絲蛋白2

普氏糞桿 2-溴-6-氟苯輪狀病IgM抗體

擬青霉 5-羧基-2-苯磷化組蛋白

球孢白僵鹽羅匹尼羅三磷肌

布氏蟲草 4-乙基環(huán)己烷甲磷脂酰肌

Sphingopyxis contaminans 3-聯(lián)苯頻那酯四磷肌

產(chǎn)克雷伯氏 2-溴咪唑并[1,2-a]吡白介34

灰黃青霉四氫異喹啉白介5受體α

猴頭喹喔啉白介3受體α

Bacillus myloliquefaciens subsp. plantarum 3--4-氟苯磺酰抗表皮基底膜抗體

青霉屬特比萘芬NOD樣受體家族蛋白3

Pestalotiopsis neglecta 5-溴-2-甲基-3-硝基吡啶糖基化載脂蛋白A1

紅色紅曲霉 3,5-二ATP合成

国产精品成人网站,亚洲欧美精品在线,色一情一乱一伦,又大又紧又粉嫩18P少妇

精子活體染色液(伊紅法) 返回列表頁(yè)

儀表網(wǎng)

會(huì)員登錄

收藏該商鋪

提示