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產地 | 國產 | 加工定制 | 是 |
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適用領域 | 科研 | 貨號 | FS-01X9644 |
產品屬于:
產品名稱:小鼠巨噬細胞
產品英文:Ana-1
貨號:FS-01X9644
細胞培養(yǎng)條件:1640+10%FBS+1%P/S
生長狀態(tài):懸浮生長
產品規(guī)格:1×106
單位:T25/瓶
是否提供細胞STR鑒定:不提供STR鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度(℃)37
運輸溫度(℃):常溫
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞 在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。 3.研究的樣本可以達到比較均一性 通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。 4.研究內容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。 4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。 7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
人抗甲型肝炎病毒IgM抗體(anti-HAV)ELISA試劑盒 Human anti-hepatitis A virus IgM antibody,anti-HAV ELISA Kit
人抗甲型肝炎病毒IgG抗體(anti-HAV)ELISA試劑盒 Human anti-hepatitis A virus IgG antibody,anti-HAV ELISA Kit
人抗副流感病毒IgM抗體(anti-PIV IgM)ELISA試劑盒 Human anti-parainfluenza virus IgM antibody, anti-PIV IgM ELISA Kit
人抗丁型肝炎病毒抗體(anti-HDV)ELISA試劑盒 Human anti-hepatitis D virus antibody,anti-HDV ELISA Kit
人抗丙型肝炎病毒抗體(anti-HCV)ELISA試劑盒
人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒 Human anti-typhus antibody ELISA Kit
人抗流行性出血熱病毒抗體IgG (EHF)ELISA試劑盒Human anti-epidemic hemorrhagic fever virus IgG antibody,EHF IgG ELISA Kit
人包蟲抗體IgG ELISA試劑盒Human echinococcus antibody IgG ELISA Kit
人百日咳毒素(PT)ELISA試劑盒Human Pertussiu Toxin,PT ELISA Kit
人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒Human Candida Albicans,C.albicans ELISA Kit
人流行性乙型腦炎抗體IgG(JE IgG)ELISA試劑盒Human Coronaviruses IgG ELISA Kit
人沙眼衣原體抗體(CT)ELISA試劑盒Human Chlamydia trachomatis,CT ELISA Kit
人血吸蟲(schistosoma)ELISA試劑盒human schistosoma ELISA Kit
人輪狀病毒抗原(RV Ag)ELISA試劑盒Human Rotavirus antigen,RV Ag ELISA Kit
人軍團菌抗原(LP Ag)ELISA試劑盒Human Legionella pneumophila antigen,LP Ag ELISA Kit
人大腸菌素(colicin)ELISA試劑盒human colicin ELISA Kit
人腺病毒抗原(ADV-Ag)ELISA試劑盒Human Adenovirus Antigen,ADV-Ag ELISA Kit
人旋毛蟲抗體(Trichinella Ab)ELISA試劑盒Human Trichinella antibody ELISA Kit
人破傷風抗體(Tetanus Ab)ELISA試劑盒Human Tetanus Antibody ELISA Kit
小鼠巨噬細胞ABCB5 ATP結合蛋白家族5抗體 0.1ml
ABCB6 ATP結合蛋白家族6抗體 0.1ml
ABCF1 ATP結合盒蛋白家族GCN20F家族1抗體 0.1ml
ABCG1 三磷酸腺苷結合盒亞家族G1抗體 0.1ml
ABCG2/CD338 三磷酸腺苷結合轉運蛋白G超家族成員2抗體 0.1ml
KAT4 細胞周期基因1蛋白抗體 0.1ml
ABCG4 ABC膜轉運蛋白抗體 0.1ml
ABCG5 三磷酸腺苷結合轉運蛋白G超家族成員5抗體 0.2ml
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