細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細胞    

產(chǎn)品英文：MA-891

貨號：FS-01X9672

細胞培養(yǎng)條件：1640+10% FBS+1%P/S

生長狀態(tài)：貼壁生長

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

人克拉拉細胞蛋白(CC16) ELISA試劑盒 Human Clara cell protein,CC16 ELISA Kit

人黑色細胞抗體(MC Ab)ELISA試劑盒Human melanocyte antibody,MC Ab ELISA Kit

人細胞周期D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒Human Cyclin-D3 ELISA Kit

人細胞周期D2(Cyclin-D2)ELISA Human Cyclin-D2 ELISA Kit

人細胞周期D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒Human Cyclin-D1 ELISA Kit

人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)ELISA試劑盒Human microtransferrinuria,MTF ELISA Kit

人鱗狀上皮細胞癌抗原2(SCCAg-2)ELISA試劑盒Human Squamous Cell Carcinoma Antigen 2,SCCAg 2 ELISA Kit

人癌胚抗原(CEA/CD66)ELISA試劑盒Human carcinoembryonic antign,CEA ELISA Kit

人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D(SP-D)ELISA試劑盒 Human Pulmonary surfatcant-associated protein D,SP-D ELISA Kit

人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)ELISA試劑盒Human Pulmonary surfatcant-associated protein C,SP-C ELISA Kit

人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)ELISA試劑盒Human Pulmonary surfatcant-associated protein B,SP-B ELISA Kit

人肺炎支原體抗體(MP-Ab)ELISA試劑盒Human Mycoplasma pneumoniae antibody,MP-Ab ELISA Kit

人肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab)ELISA試劑盒 Human Chlamydia pneumoniae antibody,Cpn-Ab ELISA Kit

人肺耐藥蛋白(LRP)ELISA試劑盒Human Lung resistance-related protein,LRP ELISA Kit

人α1抗胰(AACT)ELISA試劑盒Human Alpha1 Antichymotrypsin,AACT ELISA Kit

人幽門螺桿菌細胞毒相關(guān)基因蛋白A-IgG(HP-CagA-IgG)ELISA試劑盒Human Helicobacter pylori cytotoxin-associated gene A protein IgG,HP-CagA-IgG ELISA Kit

人粘蛋白/粘液7(MUC7)ELISA試劑盒Human Mucin-7,MUC7 ELISA Kit

人粘蛋白/粘液5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒Human Mucin-5 subtype AC,MUC5AC ELISA Kit

人轉(zhuǎn)/谷丙轉(zhuǎn)(ALT/GPT)ELISA試劑盒 Human Alanine Aminotransferase,ALT/GPT ELISA Kit
小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細胞CD168/RHAMM  透明質(zhì)介導細胞游走受體抗體 0.2ml

polyprotein[Classical swine fever virus, CSFV]  抗豬繁殖與呼吸綜合征/豬藍耳病病毒抗體 0.2ml

CSFV/Classical swine fever virus  豬瘟病毒抗體 0.2ml

CSFV/Classical swine fever virus  豬瘟病毒抗體 0.2ml

Integrin beta 6  整合β6抗體（Integrin β6） 0.2ml

IFITM1/CD225  干擾誘導跨膜蛋白1抗體 0.1ml

CSFV/Classical swine fever virus  豬瘟病毒抗體 0.2ml

NAPSIN A/ASP4  天冬蛋白ASP4抗體 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。