細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：小鼠黑色素瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記    

產(chǎn)品英文：B16-F10+LUC

貨號(hào)：FS-01X9647

細(xì)胞培養(yǎng)條件：DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%P/S

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細(xì)胞STR鑒定：不提供STR鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫   

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

注意事項(xiàng)：

人降鈣素原(PCT)ELISA試劑盒 Human Procalcitonin，PCT ELISA Kit

人生長(zhǎng)激素結(jié)合蛋白(GHBP)ELISA試劑盒 Human Growth Hormone Binding Protein，GHBP ELISA Kit

人腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒 Human adrenomedullin，ADM ELISA Kit

人免疫反應(yīng)性生長(zhǎng)激素(irGH)ELISA試劑盒Human Immunoreactive growth hormone，irGH ELISA Kit

人雌激素受體(ER)ELISA試劑盒Human Estrogen Receptor，ER ELISA Kit

人糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)ELISA試劑盒Human glucocorticoid receptor-β，GR-β ELISA Kit

人糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α)ELISA試劑盒Human glucocorticoid receptor-α，GR-α ELISA Kit

人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)ELISA試劑盒Human Ultrasensitivity Tri-iodothyronine，u-T3 ELISA Kit

人黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA試劑盒Human Luteinizing Hormone-Releasing Hormone，LHRH ELISA Kit

人8異前列腺素(8-iso-PG)ELISA試劑盒Human 8-iso prostaglandin，8-iso-PG ELISA Kit

人腎素(Renin)ELISA試劑盒 Human Renin ELISA Kit

人腎上腺素(EPI)ELISA試劑盒Human Epinephrine/Adrenaline，EPI ELISA Kit

人雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒Human Estradiol receptor，ER ELISA Kit

人血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒Human angiotensinogen，aGT ELISA Kit

人血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA試劑盒Human angiotension Ⅰ，Ang-Ⅰ ELISA Kit

人卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒Human Follistatin，F(xiàn)S ELISA Kit

人兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒Human catecholamine，CA ELISA Kit

人乙酰受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒Human acetylcholine receptor antibody，AChRab ELISA Kit

人5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒Human 5-Hydroxytryptamine，5HT ELISA Kit
小鼠黑色素瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記TdT/DNTT  末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶抗體 0.2ml

phospho-c-Abl(Thr754)  磷酸化非受體酸激酶c-Abl抗體 0.1ml

FUCA1/Alpha L fucosidase I  α-L巖藻糖苷酶抗體 0.2ml

TNFR1/TNF Receptor I  腫瘤壞死因子受體1抗體 0.1ml

HHV8/ORF K14  人類皰疹病毒8 ORF14抗體 0.2ml

SEMA6D  軸突導(dǎo)向因子SEMA6D抗體 0.2ml

plant lectin B4/IB4  植物凝集素IB4 0.2ml

SNX1/Sorting nexin1  分選連接蛋白1抗體 0.2ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。