當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TDKK1人Dickkopf ELISA試劑盒實驗原理
公司“質量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | DKK1人Dickkopf ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human Dickkopf 1, DKK1 Elisa Kit |
貨號 | FS-H63342 |
ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果。
引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準確的實驗結果,可提供免費技術咨詢服務!
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樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準
Rhizopussp. 根霉屬的菌Rhizopussp.安全等級:1模式菌株:no釀酒17生長條件:28-30℃ 純度:>90%(GC),含100 ppm 對叔丁基鄰二酚穩(wěn)定劑
RhizopusformosensisNakazawa 中國臺灣根霉RhizopusformosensisNakazawa安全等級:1模式菌株:no糖化菌17,50生長條件:28-30℃ 純度:98%
RhizopuschinensisSaito 華根霉RhizopuschinensisSaito安全等級:1模式菌株:no糖化菌15,17生長條件:28-30℃ 純度:98%
Rhzopus arrhizus Fisher 少根根霉Rhzopus arrhizus Fisher凍干安全等級:1模式菌株:no產(chǎn)乳綜合PDA:馬鈴薯煮汁1000mL,磷二氫鉀 3g,鎂 1.5g,葡萄糖 20g,維生素B1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。生長條件:25-28℃,好氧 純度:97%
Phanerochaetc chrysosporium 白腐菌Phanerochaetc chrysosporium凍干安全等級:1模式菌株:no綜合PDA:馬鈴薯煮汁1000mL,磷二氫鉀 3g,鎂 1.5g,葡萄糖 20g,維生素B1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。馬鈴薯煮液:200g馬鈴薯,去皮,切塊,放入蒸餾中煮沸30min,取濾液定容至1000mL,備用。121℃,15min。生長條件:28-32℃,好氧 純度:97%
PenicilliumspinulosumThom 青霉PenicilliumspinulosumThom安全等級:1模式菌株:no15生長條件:25-26℃ 純度:95%
PenicilliumpurpurogenumStoll 產(chǎn)紫青霉PenicilliumpurpurogenumStoll安全等級:1模式菌株:no15生長條件:25-26℃ 純度:98%
PenicilliumlilacinumThom 淡紫青霉PenicilliumlilacinumThom安全等級:1模式菌株:no15生長條件:25-26℃ 純度:98%
DKK1人Dickkopf ELISA試劑盒實驗原理W.L.營養(yǎng)肉湯 (CM0501)西紅花苷II2-氨基-3-甲基吡RGS2 peptide G蛋白信號轉導調節(jié)因子2抗原
紫色麥康凱肉湯 (麥康凱肉湯 (US 配方)) (CM0005a)桑色素2-氨基-3-甲基吡RhoA (RhoA protein) RhoA抗原
紫色麥康凱肉湯 (US 配方) (CM0006a)D-(-)-奎寧2-氨基-5-甲基吡Rho C(Ras homolog gene family member C) RhoC抗原
無鹽麥康凱瓊脂 (CM0007b)梓2-氨基-5-甲基吡RNF148(Ring finger protein 148) 環(huán)指蛋白148抗原
緩沖蛋白胨水 (CM0509)根皮苷2-氨基-5-甲基吡ROCK1 (Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 1) Rho相關蛋白激酶1抗原
卡里-布萊爾轉運培養(yǎng)基 (CM0519)蛻皮激素5-溴-4--3-吲哚-α-D-N-乙酰神經(jīng)氨鹽ROCK2 (Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 2) Rho相關蛋白激酶2抗原
Giolitti-Cantoni 肉湯 (CM0523)6-姜酚(姜辣素)3-溴-4-苯乙烯RXR Alpha(retinoid-X receptor alpha) 核受體RXRα抗原
SS 改良瓊脂(CM0533)蒿本內(nèi)酯3-溴-4-苯乙烯S6PDH(NADP sorbitol-6-phosphate dehydrogenase) 6-磷山梨醇脫氫酶抗原
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