精子稀釋液(計(jì)數(shù)液)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9929

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：精子稀釋液(計(jì)數(shù)液)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號(hào)：FS-X9929

產(chǎn)品介紹:

用途：

精子計(jì)數(shù)

注意事項(xiàng)：

通過(guò)相差顯微鏡觀察

儲(chǔ)存條件：室溫，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

中慢生華癸根瘤菌腦富含膜附著信號(hào)蛋白1抗體Human GLRA1 小鼠β甘露糖(β Manase)免疫試劑盒

鈉線菌屬卵黃狀黃斑病蛋白3抗體Human GLRB 小鼠β干擾(IFN-β/IFNB)免疫試劑盒

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生金色鏈霉菌EBV立即早期基因BRLF1抗體Human GLYCTK 小鼠β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)免疫試劑盒

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木拉克酵母屬BTRC2蛋白抗體Human GMCL1 小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)免疫試劑盒

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路德類酵母胎兒阿茲海默病抗原/核小體重塑因子抗體Human GINS3 小鼠α-黑色激(α-MSH)免疫試劑盒

鯊魚(yú)盧金星菌巴爾得-別德?tīng)柧C合征相關(guān)蛋白2抗體Human GLIS1 小鼠αS轉(zhuǎn)移(α-GST)免疫試劑盒

節(jié)桿菌巴爾得-別德?tīng)柧C合征相關(guān)蛋白5抗體Human GIPC1 小鼠α甘露糖(α Manase)免疫試劑盒

擬諾卡氏菌屬菌種Nocardiopsis│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>95.0%,BCβ淀粉樣蛋白1-42試劑盒日蟾它靈

熱帶假絲酵母Candida│tropicalis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRβ淀粉樣蛋白1-40試劑盒七葉皂IIb

球毛殼Chaetomium│globosum 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BCβ半乳糖試劑盒七葉皂IIa
精子稀釋液(計(jì)數(shù)液)曲霉 N,N-二乙基間甲苯多功能肽7

Bacillus tequilensis 2-甲酰-5-氟吡啶多功能肽2

繩狀籃狀 2,5-二-4,6-二甲基煙糖皮質(zhì)

產(chǎn)黃青霉 2-萘磷化c-Jun氨基末端激

綠色木霉 2,4-二甲氧基脆性X智力遲鈍蛋白1

假單胞 (2--5-苯基)(4-氟苯基)甲酮信號(hào)4D

栓 3-氟-5-甲氧基苯乙角蛋白18

三葉草根瘤 3-氟-5-甲氧基苯甲彈性蛋白2，中性粒

鏈霉 2,4-二氟-5-溴苯色-2,3-雙加氧

耐輻射奇球 7-二乙氨基-4-甲基色CYP19

考克氏 2-甲基-3-氨基-5-溴吡啶半乳糖凝集

釀酒酵母 2-甲基-3--5-溴吡啶半胱蛋白7

番鴨細(xì)小病 3-溴-2-苯小而密低密度脂蛋白

綠毛殼 3-叔丁基二甲硅氧基戊二酐戊型肝炎病抗體

單增李斯特氏 1-(5-氟-2-苯基)乙酮賈地鞭毛蟲(chóng)抗體
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)