當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TOX-B人食欲素/阿立新BELISA試劑盒實驗原理
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準確的實驗結(jié)果,可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù)!
產(chǎn)品名稱 | OX-B人食欲素/阿立新BELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human Orexin B, OX-B Elisa Kit |
貨號 | FS-H63306 |
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等?
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Loktanella│maricola 居海洛克氏菌Loktanella│maricola分離基物:樣/海斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:;471生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:>98.0%(GC)
Aquimarinamuelleri AquimarinamuelleriAquimarinamuelleri分離基物:培養(yǎng)基:海樣本,日本安全等級:1模式菌株:102生長條件:28℃ 純度:97%
Shimiaisoporae ShimiaisoporaeShimiaisoporae安全等級:1模式菌株:102生長條件:25℃ 純度:97%
Loktanella│hongkongensis 香港洛克氏菌Loktanella│hongkongensis分離基物:沉積物/深海淺黃色鈣質(zhì)軟泥凍干物安全等級:1模式菌株:no端微生物/抗γ輻射1001生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Roseivivaxisoporae RoseivivaxisoporaeRoseivivaxisoporae安全等級:1模式菌株:102生長條件:25℃ 純度:97%
Roseivivaxhalodurans RoseivivaxhaloduransRoseivivaxhalodurans分離基物:疊層石上的輪藻安全等級:1模式菌株:168生長條件:28℃ 純度:97%
Gramellaechinicola GramellaechinicolaGramellaechinicola分離基物:中間球海膽安全等級:1模式菌株:102生長條件:28℃ 純度:99%
Oceanicola│marinus 海洋海棲菌Oceanicola│marinus分離基物:樣/上層海凍干物安全等級:1模式菌株:no潛在的有機污染物降解菌/分離自石油富集菌群821生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:99%
OX-B人食欲素/阿立新BELISA試劑盒實驗原理Nutrient Agar人表皮黑色素-中色素微RNA4-溴異喹啉H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin) 流感病A抗原
麥芽浸出液瓊脂人表皮黑色素-深色素微RNA4-溴異喹啉Haase(hyaluronidase) 透明質(zhì)酶/玻璃酶抗原
Malt Extract Agar人成纖維-胎兒微RNA4-溴異喹啉HA tag HA tag標簽多肽
Fluid Lactose Medium人成纖維-新生兒微RNA4,4′-雙(2-苯并噁唑基)二苯乙烯HA tag(map) HA tag標簽(分支多肽)
Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)人成纖維-微RNA4,4′-雙(2-苯并噁唑基)二苯乙烯HAI-1(Hepatocyte Growth Factor Activator Inhibitor 1) 肝生長因子激活物抑制因子抗原
Baird-Parker Agar Base人毛微RNA六銠三銨HBA1(hemoglobin alpha 1) 人類血紅蛋白α1抗原
卵黃亞碲鹽增菌液人生發(fā)基質(zhì)微RNA3,5-二-4-基吡VWCE/URG11(von Willebrand factor C and EGF domain-containing) 乙型肝炎病X蛋白(HBxAg)抗原
EY lurite Enrichment人外根殼微RNA3,5-二-4-基吡URGCP/URG4(Up-regulator of cell proliferation) 乙型肝炎病X蛋白(HBxAg)抗原
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準
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